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一、單細(xì)胞懸液制備流程

(以一般的哺乳動(dòng)物組織為例)

1、用滅菌的剪刀或手術(shù)剪將組織切成小塊,

2、在冰上將組織塊兒加入適當(dāng)?shù)?/span>RPMI 1640培養(yǎng)基或PBS緩沖液，清洗至少3次，去除多余血*和雜貪。

3、將洗干凈的組織剪碎，剪的越碎越好，增大和消化試劑接觸的面積。加入適量的消化試劑。(這里推薦使用我公司的哺乳動(dòng)物組織通用解離試劑盒，按照說明書操作即可。)顛倒混。

4、放置于酶作用的最佳溫度下，一般37℃℃，進(jìn)行孵育，每隔5分鐘震蕩混勻。

5、不同類型、狀態(tài)的組織消化時(shí)間不同，每隔一定的時(shí)間質(zhì)檢一次細(xì)胞懸液，根據(jù)細(xì)胞總量及活性等確定消化停止時(shí)間。對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織，消化時(shí)間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37℃消化15-45分鐘，也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，可以認(rèn)為已消化充分。

6、消化完成后，用合適的細(xì)胞篩進(jìn)行過濾，收集濾液。

7、讓細(xì)胞沉降并倒出多余的含酶液體。

8、用PBS緩沖液 洗滌并重復(fù)2-3次。加入適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或緩沖液，重懸細(xì)胞。

9、用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)控并記錄。

注:若得到的細(xì)胞懸液中紅細(xì)胞、碎片和死細(xì)胞過多，按需決定是否進(jìn)行相應(yīng)的去除操作。

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