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Toxin腸毒素的用途——作為超抗原

閱讀:688      發(fā)布時(shí)間:2024-11-27
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原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,能夠非特異性激活T細(xì)胞增殖并釋放過量細(xì)胞因子,可用于抗腫瘤治療。T細(xì)胞活化通過暴露于特定抗原(例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB))來測(cè)定。SEB是一種細(xì)菌毒素,能夠與抗原呈遞細(xì)胞 (APC) TCR上的MHCII類分子結(jié)合,誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的釋放,例如IL-2IL-6、TNF-αIFN-γ。

 

應(yīng)用舉例:誘導(dǎo)活化T細(xì)胞

一、將 PBMCs120 K/孔)與 Nuclight 綠色試劑標(biāo)記的 Ramos 細(xì)胞(40 /孔)進(jìn)行共培養(yǎng)。使用 CD3/CD28 DynabeadCD3×CD19 BiTE 抗體或葡萄球菌腸毒素 B (SEB) 誘導(dǎo)活化。在 60 h 時(shí),使用 T 細(xì)胞活化分析試劑盒、T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合 iQue® 3 系統(tǒng)分析 10 µL 樣本。

每種活化因子會(huì)導(dǎo)致不同的 CD3+ T 細(xì)胞蛋白表達(dá)和殺傷特征:

1.CD3/CD28 Dynabead 誘導(dǎo)的 T 細(xì)胞活化呈現(xiàn)濃度依賴的特性。最高的微球數(shù)量對(duì)應(yīng)于最大的活化標(biāo)志物表達(dá)百分比。該結(jié)果與高水平的細(xì)胞耗竭標(biāo)志物呈現(xiàn)相關(guān)性。

2.Dynabead SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 抗體介導(dǎo)的靶細(xì)胞死亡增量最多,活化和耗竭水平顯著降低。這說明 BiTE 介導(dǎo)的免疫細(xì)胞殺傷時(shí)間可能持續(xù)的較長(zhǎng)。

3.SEB 刺激,即使在zui濃度下,也可使 T 細(xì)胞活化并產(chǎn)生最大殺傷率,導(dǎo)致高水平的 T 細(xì)胞耗竭。

原理:葡萄球菌腸毒素屬于超抗原,能夠非特異性激活T細(xì)胞增殖并釋放過量細(xì)胞因子,可用于抗腫瘤治療。T細(xì)胞活化通過暴露于特定抗原(例如葡萄球菌腸毒素 B (SEB))來測(cè)定。SEB是一種細(xì)菌毒素,能夠與抗原呈遞細(xì)胞 (APC) TCR上的MHCII類分子結(jié)合,誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的釋放,例如IL-2IL-6、TNF-αIFN-γ

 

 圖片

二、使用來自 T 細(xì)胞活化分析試劑盒、T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷分析試劑盒和 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒的 Qbeads 測(cè)定 Nuclight 綠色標(biāo)記的 Ramos PBMC3:1 比例)共培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞因子的釋放數(shù)據(jù)。在多個(gè)試劑盒中均檢測(cè)了 IFN? TNFa 的濃度,以便將所有試劑盒的測(cè)定結(jié)果取平均值。

各個(gè)活化因子對(duì)細(xì)胞因子分泌和對(duì)表面蛋白表達(dá)的影響相當(dāng):

1.在使用的微球數(shù)量范圍內(nèi),CD3/CD28 Dynabead 誘導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放呈濃度依賴性增加。

2.與微球或 SEB 相比,CD3×CD19 BiTE 刺激后的細(xì)胞因子釋放始終較低(最高刺激濃度下的顆粒酶 B 濃度除外)。該結(jié)果表明,在降低毒性風(fēng)險(xiǎn)的情況下(例如細(xì)胞因子釋放綜合征),可以實(shí)現(xiàn)高水平的細(xì)胞殺傷。

3.SEB 可誘導(dǎo)高水平的細(xì)胞因子釋放(即使在低濃度下)。

 圖片

三、將 PBMCs25 K/孔)與貼壁 AU565 細(xì)胞(5 K/孔)進(jìn)行共培養(yǎng)。使用 SEB 誘導(dǎo) T 細(xì)胞活化。在 60 h 時(shí),使用 T 細(xì)胞活化分析試劑盒、T 細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷和 T 細(xì)胞耗竭分析試劑盒聯(lián)合 iQue® 3 系統(tǒng)提取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞,進(jìn)行終點(diǎn)分析。

SEB 活化誘導(dǎo)靶細(xì)胞殺傷呈濃度依賴性增加,伴隨 CD3+ T 細(xì)胞上活化(CD69CD25 HLA-DR)和耗竭(PD-1、LAG-3 TIM-3)標(biāo)志物的高表達(dá)(在所有使用的 SEB 濃度中均是如此)。

 圖片

 

其他應(yīng)用:抗體制備、毒素檢驗(yàn)、多種免疫和偶聯(lián)試驗(yàn)、藥物研發(fā)等。

 

Toxin腸毒素代理——天津益元利康生物科技有限公司,成立于2018年,坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、 細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向,專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售,經(jīng)營(yíng)的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKooAbcam、ElabscienceGeneTex、Gentaur、immunostar、Invitrogen、invivogenKerafast、Toxin等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù),努力成長(zhǎng)為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。

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