CCK-8檢測(cè)實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞活力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)）是一種常用的細(xì)胞增殖和毒性檢測(cè)方法，通過(guò)測(cè)量細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化，從而來(lái)評(píng)估細(xì)胞的活力。CCK-8檢測(cè)是一種簡(jiǎn)便、快速、高靈敏度的細(xì)胞活力檢測(cè)方法，適用于多種細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件。本文主要從實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟、注意事項(xiàng)等方面來(lái)介紹該實(shí)驗(yàn)。
一、實(shí)驗(yàn)原理
該試劑中含有WST-8，它在電子載體（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚染料formazan，生成的甲瓚物formazan的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，因此可以用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
活力計(jì)算:
細(xì)胞活力＊(%）=[A(加藥)—A（空白）]/［A（0加藥）—A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白):具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0加藥）:具有細(xì)胞、CCK8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 實(shí)驗(yàn)前將細(xì)胞接種96孔板，每組鋪5個(gè)平行孔（孔的外圍一圈加PBS，以防邊緣效應(yīng)影響實(shí)驗(yàn)組），在96孔板中配置100μl的細(xì)胞懸液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)。
2. 進(jìn)行CCK-8實(shí)驗(yàn)，棄掉孔內(nèi)原有培養(yǎng)基并每孔加入新配制的含有終體積1/10 CCK-8試劑盒的完quan培養(yǎng)基，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4hr（根據(jù)細(xì)胞量決定時(shí)間長(zhǎng)短，細(xì)胞越多OD值越大且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)OD值也會(huì)變大，最適OD值應(yīng)保持在2以內(nèi)）。
3. 在450nm處測(cè)定吸光值。
4. 計(jì)算細(xì)胞增殖率：（實(shí)驗(yàn)組OD-空白組OD）/（對(duì)照組OD-空白組OD）
三、注意事項(xiàng)
1. 細(xì)胞接種密度要適中，過(guò)低或過(guò)高的密度都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2. CCK-8試劑的添加量要適量，過(guò)多或過(guò)少都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 培養(yǎng)時(shí)間要適當(dāng)，過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短的培養(yǎng)時(shí)間都可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的偏差。
4. 測(cè)定吸光度時(shí)，要確保酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)準(zhǔn)確，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
5.如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
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