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Toxin金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)的應(yīng)用

閱讀:1179      發(fā)布時(shí)間:2024-8-14
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金黃色葡萄球菌腸毒素BStaphylococcal enterotoxin B, SEB)由于具有超抗原性,且在SEs系列毒素中毒性最qiang、最為耐熱,對(duì)腸胃道蛋白酶最有抵抗性,在食品加工過程中極難去除,故對(duì)人類健康具有嚴(yán)重的威脅。

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金黃色葡萄球菌腸毒素B單克隆抗體的研制及雙功能免疫層析試紙條產(chǎn)品開發(fā)一文中,就首先以SEB為免疫原,通過免疫Balb/C小鼠,測(cè)定小鼠血清效價(jià)、細(xì) 胞融合、篩選陽性雜交瘤細(xì)胞、亞克隆以及抗體配對(duì)等一系列操作,最終獲得兩株能穩(wěn)定分泌抗SEB單克隆抗體的細(xì)胞株(分別命名為15H115D6),且兩株抗體能夠與SEB形成穩(wěn)定的三明治"夾心結(jié)構(gòu);兩株抗SEB單克隆抗體均為IgG1 亞型,親和常數(shù)分別為2.08 × 109 M以及1.81 × 109 M;且與其它四種常見腸毒素 SEA,SEC,SED以及SEE均無交叉反應(yīng)。 其次,以油氨修飾的金納米粒子(AuNPs@OA)、紅色聚集誘導(dǎo)發(fā)射熒光染料(AIEgens)為比色、熒光功能材料,1-十八烯馬來酸酐聚合物(PMAO)為填充劑,通過微乳液法合成了具有Janus結(jié)構(gòu)的比色-熒光雙功能納米微球(JAIE@Au NBs)。由于AuNPs@OAAIEgens在聚合物PMAO中溶解度存在極大差異,在氯仿蒸發(fā)過程中AuNPs@OAAIEgens發(fā)生明顯相分離,導(dǎo)致AIEgens自動(dòng)聚集成核,PMAO形成殼層,而AuNPs@OA分布在PMAO層一側(cè),因而形成了具有Janus結(jié)構(gòu)的比色-熒光雙功能J-AIE@Au NBs。由于AuNPsAIEgens存在物理間隔,且AuNPsAIEgens一側(cè),因此有效地消除了兩者之間的能量轉(zhuǎn)移,且降低了熒光內(nèi)濾效應(yīng),從而極大地保留了AIEgens的熒光信號(hào)。隨后將單克隆抗體15H11標(biāo)記J-AIE@Au NBs獲得免疫探針,在NC膜上噴涂抗體5D6制備獲得比色定性以及熒光定量檢測(cè)SEB的免疫層析試紙條J-AIE@Au-ICA。在最佳條件下,該試紙條檢測(cè)全脂乳中SEB的定量線性范圍為0.39 ng/mL ~ 400 ng/mL,最di檢測(cè)限(Limit of detection, LOD)為0.09 ng/mL,靈敏度較傳統(tǒng)ELISA法提高了近70 倍;同時(shí),采用比色法裸眼定性檢測(cè)SEB的最di檢測(cè)限為1.56 ng/mL。該試紙條 檢測(cè)全脂乳中SEB的批內(nèi)、批間加標(biāo)回收率為86.0 2%115 %,變異系數(shù)介于 4.97 %12.86 %之間,且與其它4種常見腸毒素?zé)o交叉反應(yīng)。此外,該試紙條檢 測(cè)生牛乳以及脫脂乳中SEBLOD分別為0.19 ng/mL0.19 ng/mL。隨后,將試紙 條分別用于檢測(cè)人工污染SEB的全脂乳、生牛乳和脫脂乳樣品,結(jié)果顯示回收率 介于91.04 %118.82 %之間,變異系數(shù)介于3.91 %12.86 %之間。以上結(jié)果表明,本研究建立的比色、熒光雙功能試紙條能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)多種牛奶中的SEB快速且準(zhǔn)確的定量分析。

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