細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)環(huán)境下，使其生長(zhǎng)繁殖，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)物可以是單個(gè)細(xì)胞，也可以是細(xì)胞系。細(xì)胞復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)，下面讓我們一起來(lái)看看細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題都有哪些吧！
1.如何選用細(xì)胞系培養(yǎng)基？
優(yōu)先根據(jù)細(xì)胞來(lái)源公司提供的培養(yǎng)條件，其次參考ATCC推薦細(xì)胞對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基。一般建議不要隨意更換培養(yǎng)基種類。細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用與原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，可能造成細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化或無(wú)法存活，以及細(xì)胞的表型功能丟失。
2.為何培養(yǎng)基用一段時(shí)間后，顏色偏紫？
培養(yǎng)基隨著多次開(kāi)蓋會(huì)使培養(yǎng)液CO2 逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性從而變紫，尤其是剩余的培養(yǎng)基越少越容易變紫。可將培養(yǎng)瓶瓶蓋旋松放入二氧化碳培養(yǎng)箱校正溶液PH值，過(guò)一段時(shí)間就會(huì)變回正常。變紫的培養(yǎng)基是可以繼續(xù)使用的，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)在培養(yǎng)箱會(huì)自動(dòng)恢復(fù)顏色。
3.細(xì)胞培養(yǎng)液變黃變渾，如何處理？
細(xì)胞培養(yǎng)液變黃多半是細(xì)胞密度過(guò)大，細(xì)胞增殖速度過(guò)快，產(chǎn)生大量酸性代謝廢物，導(dǎo)致細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不足。而培養(yǎng)液變渾多半是發(fā)生了細(xì)菌污染。出現(xiàn)這種情況應(yīng)立即進(jìn)行消化傳代處理。
4.血清中出現(xiàn)的沉淀是什么，有影響嗎？
?、倮w維蛋白，是經(jīng)常出現(xiàn)的較大沉淀物，可達(dá)到1-2mm，用肉眼可觀察到；
?、谀懝檀?、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)，是血清出現(xiàn)沉淀物的常見(jiàn)原因；
?、哿姿徕}，也是一種常見(jiàn)沉淀物，通常會(huì)使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)時(shí)會(huì)增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點(diǎn)，這些小黑點(diǎn)由于布朗運(yùn)動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。
5.細(xì)胞何時(shí)換液最佳？
?、偌?xì)胞消化傳代后，建議隔天或隔兩天換一次液；
?、诩?xì)胞傳代后，發(fā)現(xiàn)碎片多、死細(xì)胞多，在細(xì)胞形態(tài)已經(jīng)形成的前提下可第二天換液；
?、蹖?duì)于生長(zhǎng)速度較慢的細(xì)胞，可多放點(diǎn)培養(yǎng)基，減少換液次數(shù)，讓細(xì)胞靜養(yǎng)；
④細(xì)胞傳代后，細(xì)胞分布不均、細(xì)胞堆疊、細(xì)胞間隙大、局部密度大，這些情況下不用換液，可采取消化重鋪的方式。
7.細(xì)胞支原體污染如何處理？
支原體污染是比較難去除的，特別容易復(fù)發(fā)，一般建議直接更換新的細(xì)胞，如特別精貴或重要的細(xì)胞可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(泰樂(lè)霉素)、喹諾酮類抗生素。
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