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ELISA實驗的常見問題

閱讀:796      發(fā)布時間:2024-8-8
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  ELISA是分子生物學、免疫學和細胞生物學研究中常用到的實驗操作之一,相信大家常常會有這樣那樣的實驗問題。下面讓我們一起來看看ELISA實驗的常見問題都有哪些吧!
 
  1. 洗板不干凈
 
  解決方法:
 
 ?、俪浞窒礈欤喝绻窗宓臅r間不夠,會導致抗體殘留,陰性對照會顯色,嘗試延長洗板時間,增加洗板頻率,在洗液中添加表面活性劑Tween-20。
 
  在洗板時要保證每步都洗滌干凈,充分拍板直至孔內(nèi)沒有明顯的殘留液體。
 
  ②避免交叉污染:棄去洗液和孵育的抗體時避免交叉污染,移液槍頭盡可能一次性使用,拍板的濾紙不要反復使用。
 
  2. 顯色液變質(zhì)或者試劑過期
 
  解決方法:檢查試劑盒有效期,或使用新的試劑盒并按照說明書要求保存試劑盒。每次用剩下的顯色液最好不要回收,或者只回收洗凈的容器裝的顯色液。
 
  3. 試劑稀釋有誤,檢測抗體/酶結(jié)合物工作液濃度過高
 
  解決方法:按照說明書推薦的稀釋倍數(shù)稀釋抗體。
 
  4. 試劑盒組分未平衡
 
  解決方法:試劑盒每個組分都需要平衡至室溫后進行實驗。
 
  5. 混用其他試劑盒試劑
 
  解決方法:保證使用試劑盒內(nèi)完整的一套試劑進行實驗,不同品牌及不同批次間的試劑可能存在不匹配現(xiàn)象,不同批號的試劑不要混用。
 
  6. 蒸餾水受酶等污染
 
  解決方法:使用新鮮蒸餾水。
 
  7. 培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長
 
  解決方法:孵育時間過長、溫度過高可能會導致非特異性結(jié)合增加,從而造成本底增高。檢查恒溫箱,確保孵育溫度穩(wěn)定在37℃,按照說明書的反應(yīng)時間進行孵育。
 
  8. 酶標板底部有污漬
 
  解決方法:在加完終止液之后,檢測之前,用75%乙醇浸潤的脫脂棉球擦拭酶標板底部,確認沒有污漬之后再檢測。
 
  9. 洗液被污染
 
  解決方法:洗液現(xiàn)配現(xiàn)用,長期放置會析出,也可能會污染,導致背景偏高。
 
  更多有關(guān)ELISA實驗的常見問題,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司!

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