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sigma聚乙烯感染/轉染試劑(TR-1003-G)產品介紹

閱讀:840      發(fā)布時間:2024-2-23
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sigma聚乙烯感染/轉染試劑(TR-1003-G)

產品介紹:

聚凝胺是一種陽離子聚合物,可以大大提高逆轉錄病毒或慢病毒感染哺乳動物細胞的效率。它起到中和病毒體與細胞表面之間電荷排斥的作用,從而提高感染效率。逆轉錄病毒感染的效率在某些細胞中顯著提高了 100 1,000 倍,這是因為在感染過程中加入了聚凝胺。含有 DMSO 的聚凝胺儲液還用于介導 DNA 轉移到多種細胞類型中,例如 CHO、雞胚成纖維細胞、NINH-3T3 和髓樣細胞。

產品應用:

一、逆轉錄病毒感染

1.重組逆轉錄病毒儲液是通過將 5ml 生長培養(yǎng)基(含 5% 血清)添加接近匯合的轉染的逆轉錄病毒包裝細胞單層細胞的 100mm 平板中來制備的。24 小時后,去除培養(yǎng)基,并通過 0.45um 過濾器過濾。

2.將要感染該重組逆轉錄病毒儲液的細胞以每個100mm平板500,000個細胞的量接種在10mlwan全培養(yǎng)基中。

3. 24小時后,去除細胞的生長培養(yǎng)基。用2ml的病毒上清液(或將病毒儲液稀釋至 2ml)感染細胞,每毫升添加5ug10ug的聚凝胺(最終濃度),在 37°C 下孵育細胞 3 6 小時。

加入 8 ml wan全培養(yǎng)基。感染三天后,將細胞按 15 的比例分進選擇培養(yǎng)基。

二、轉染

將細胞鋪在wan生長培養(yǎng)基中,約有50%匯合。鋪板后18 24 小時,立即使用以下方法制備DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液:(注意:必須按照正確的順序添加每個組件。)

1. wan全生長培養(yǎng)基(60mm平板,2ml;100mm平板,3ml),加熱至37℃。

2. 質粒DNA10 ng10 ug。輕輕混合。

3. 聚凝胺的最終濃度為每毫升5ug 10ug。輕輕混合

4. 從平板中去除培養(yǎng)基,并將DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液添加到細胞中。讓細胞在 37℃下孵育620小時,前6個小時大約每1.5個小時輕輕搖動一次。

5. 去除 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液,并用DMSO 儲液輕輕覆蓋細胞(在1X HBSS 中的 15DMSO:專門培養(yǎng)基每個60 mm平板3 ml,每個100 mm平板4 ml。手動搖動培養(yǎng)皿10秒鐘,使溶液均勻分布,然后將細胞置于37℃下溫育4分鐘。

6. 立即去除DMSO儲液,并用wan全生長培養(yǎng)基輕輕沖洗細胞兩次,每個60 mm培養(yǎng)皿每次洗滌用5 ml,每個100 mm培養(yǎng)皿每次洗滌用10 ml

7. wan全生長培養(yǎng)基添加到細胞中。

8. 若要獲得穩(wěn)定的轉化子,則去除生長培養(yǎng)基,并將細胞按15比例分進選擇培養(yǎng)基

9. 若要瞬時表達,去除生長培養(yǎng)基并添加新鮮的生長培養(yǎng)基。2472小時后收獲細胞和/或培養(yǎng)基。

產品屬性:

外形:每毫升無菌超純水溶解10mg聚乙烯。

儲存及穩(wěn)定性:在-20℃可保存長達2年。

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貨號

產品名稱

規(guī)格

TR-1003-G

聚乙烯感染/轉染試劑

1 mL



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