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你知道什么是二抗嗎？讓我們一起來看看吧！

一、二抗的定義

第二抗體（二抗）是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。二抗是利用一抗是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì)，去免疫異種動物，由異種動物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應(yīng)性。

二、二抗的設(shè)計原理

根據(jù)同一種來源的同種亞型抗體的恒定區(qū)是保守的，以此充當抗原刺激機體產(chǎn)生的抗體可以識別同種亞型一抗，根據(jù)這一原理設(shè)計制備二抗。

抗IgG (H+L)恒定區(qū)：靶向一抗的重鏈和輕鏈恒定區(qū)。這些抗體也會與其他類(如IgE、IgD等)發(fā)生反應(yīng)，因為這些類之間共享輕鏈。更廣泛的表位識別(H+L)二抗使其適用于大多數(shù)需要二抗的免疫分析。

抗IgG Fc片段或重鏈恒定區(qū)：與抗IgG (H+L)二抗不同，靶向一抗Fc區(qū)域或重鏈的二抗具有類特異性，不會與其他類免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，因為每一種抗體的重鏈或者Fc片段是不一樣的（見圖2）。如果打算在Ip后進行Western blotting分析，建議使用重鏈特異性二抗來檢測位于25kDa分子量附近的目標蛋白，以避免輕鏈的干擾。此外，F(xiàn)ab片段抗Fc二抗可用于一抗在多次標記實驗孵育前預(yù)標記。

抗IgG輕鏈恒定區(qū):靶向一抗的輕鏈(kappa或lambda)。這些抗體不與一抗重鏈反應(yīng)，但識別其他免疫球蛋白類的共享輕鏈。例如，山羊抗人IgG Kappa輕鏈二抗不僅能識別IgG亞類，還能識別IgA、IgD、IgE、IgM等輕鏈。在Ip后進行Western blotting分析時，建議使用輕鏈特異性二抗來檢測來檢測位于55kDa分子量附近的目標蛋白，以避免重鏈的干擾。

抗IgG F(ab’)2片段恒定區(qū)：靶向于一抗的F(ab’)2片段區(qū)。由于識別了F(ab)區(qū)域的共享輕鏈，它們會與IgA、IgD、IgE、IgM等輕鏈發(fā)生反應(yīng)。

三、二抗的優(yōu)勢

與僅使用標記一抗直接檢測目標物相比，使用二抗識別一抗間接檢測目標物具備多種優(yōu)勢。

通用性：二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節(jié)省了時間和費用。

放大信號：一個一抗分子可以同時結(jié)合幾個標記二抗分子，從而增強信號并提高檢測靈敏度。在有些檢測中，可使用生物素化的二抗和鏈霉親和素偶聯(lián)的標記分子來進一步增強信號。

允許進行多重檢測實驗：由于二抗具有物種特異性，因此可以將實驗設(shè)計為使用源自不同物種的一抗來檢測多種目標物。使用與具有不同波長發(fā)射光的熒光染料標記的二抗來檢測不同的目標物。

保留互補位：一抗與標記分子的偶聯(lián)，有可能會影響其抗原結(jié)合位點，也稱為互補位。這將降低一抗與其靶抗原結(jié)合的能力。使用標記二抗后，可以在檢測中使用未偶聯(lián)的一抗而避免影響其與抗原的結(jié)合。

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