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質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的操作步驟

閱讀:1555      發(fā)布時(shí)間:2023-12-18
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  質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的操作步驟
 
  轉(zhuǎn)染(transfection)是細(xì)胞在一定條件下主動(dòng)或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。質(zhì)粒轉(zhuǎn)染對(duì)于哺乳細(xì)胞蛋白的表達(dá)至關(guān)重要,轉(zhuǎn)染的方法和步驟直接影響著轉(zhuǎn)染的成功與否。那么你知道質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的操作步驟有那些嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  以24孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例:
 
  一、種細(xì)胞;
 
  1. 貼壁細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一天每孔0.5-2×10E5個(gè)細(xì)胞接種于500ul培養(yǎng)基中,在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞可長至90-95%匯合度。
 
  2. 懸浮細(xì)胞:在配置轉(zhuǎn)染液前每孔4-8×10E5個(gè)細(xì)胞接種于500ul培養(yǎng)基中。
 
  二、轉(zhuǎn)染液配置,每孔細(xì)胞用量如下:
 
  1. 用50ul無血清培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA,輕輕混勻。
 
  2. 取適量合適的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑在50ul無血清培養(yǎng)基中稀釋,室溫孵育5min。
 
  3. 將前兩步所稀釋的DNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑混合,輕輕混勻,室溫放置30min。
 
  三、在每孔細(xì)胞中加入混合后的轉(zhuǎn)染液,輕輕搖勻。
 
  四、貼壁細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染4-6h后更換培養(yǎng)基,懸浮細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染后18-48h間進(jìn)行細(xì)胞換液,轉(zhuǎn)染18-48h后可檢測基因mRNA水平表達(dá)。如果檢測蛋白表達(dá),需在轉(zhuǎn)染后48-72h收集細(xì)胞樣品。
 
  五、對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,在轉(zhuǎn)染24h后以1:10傳代培養(yǎng),第二天可加入選擇培養(yǎng)基。
 
  更多有關(guān)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的操作步驟,請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司。

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