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細(xì)胞消化的方法有哪些?

閱讀:851      發(fā)布時間:2023-11-27
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細(xì)胞消化的方法有哪些?

我們的細(xì)胞在培養(yǎng)時大部分會以貼壁的形式生長,它們在機(jī)體內(nèi)時,也是與其他細(xì)胞或者細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的。細(xì)胞培養(yǎng)過程中使用的wan全培養(yǎng)基中的血清,含有許多帶陽性電荷的促細(xì)胞附著因子(層黏連蛋白 Laminine、纖維連接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)),能幫助細(xì)胞附著于帶陰性電荷的底物上,并形成連接、貼壁伸展。使細(xì)胞解除這種附著,就是細(xì)胞消化。那么你知道細(xì)胞消化的方法有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!

一、機(jī)械消化法

直接用培養(yǎng)基吹打或使用細(xì)胞刮刀,通過外力使細(xì)胞解除貼壁狀態(tài),一般用于不需要繼續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞,相較于其他方法,機(jī)械消化法無法量化控制,細(xì)胞分散效果差,且會造成大量細(xì)胞破損,影響細(xì)胞傳代狀態(tài)。

二、離子螯合法

細(xì)胞膜表面蛋白大多需要鈣、酶離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié),當(dāng)然也包含各種粘附蛋白(如:整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等),螯合劑會在不破壞細(xì)胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,使粘附蛋白失活而減少細(xì)胞-細(xì)胞間及細(xì)胞-底物間的連接作用,使細(xì)胞容易與培養(yǎng)底物分離。

0.02% EDTA是常用的離子螯合劑,在37℃效果最jia(消化敏感的細(xì)胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細(xì)胞或細(xì)胞表面標(biāo)記實驗細(xì)胞。

EDTA無法用血清終止其反應(yīng),所以在消化細(xì)胞后必須用緩沖鹽溶液(如:PBS)清洗離心,以免影響后續(xù)細(xì)胞貼壁效果。

三、酶消化法

用蛋白水解酶消化連接細(xì)胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì),適用于消化貼壁性稍強(qiáng)的細(xì)胞。上述實驗方法中最常見的還是胰酶消化。大部分細(xì)胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,但是我們發(fā)現(xiàn)吸去胰蛋白酶后,殘留的那些附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2分鐘足夠消化細(xì)胞(絕大部分1分鐘不到)。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是先采用PBS潤洗細(xì)胞吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化細(xì)胞。

更多有關(guān)細(xì)胞消化的方法,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司。


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