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夾心法與競(jìng)爭(zhēng)法的ELISA檢測(cè)原理是什么?

閱讀:1369      發(fā)布時(shí)間:2023-10-18
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ELISA的原理是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。在實(shí)際應(yīng)用中,通過(guò)不同的設(shè)計(jì),具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競(jìng)爭(zhēng)法的ELISA檢測(cè)原理是什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、夾心法原理

夾心法使用的是兩個(gè)抗體夾抗原或者兩個(gè)抗原夾抗體的方法,這種復(fù)合物被稱(chēng)之為三明治夾心結(jié)構(gòu),利用一對(duì)配對(duì)wan全的抗體,可以特異性檢測(cè)抗原,當(dāng)然主要針對(duì)的是具有至少2個(gè)以上抗原表位的抗原,抗體的配對(duì)可是門(mén)技術(shù)活,很多公司可以生產(chǎn)抗體,但是配對(duì)卻很少做,主要原因在于篩選的難度,可能開(kāi)發(fā)的幾十株針對(duì)同一抗原的抗體,都很難有一對(duì)合適的可以配對(duì),原因是多方面的,有抗原的表位、構(gòu)象等原因,也有抗體效價(jià)的原因,當(dāng)然還有篩選成本的原因,所以每一個(gè)ELISA試劑盒都是經(jīng)過(guò)多次和長(zhǎng)期的驗(yàn)證得來(lái)的。

二、競(jìng)爭(zhēng)法原理

競(jìng)爭(zhēng)法的使用相對(duì)來(lái)說(shuō)就窄一點(diǎn)了,其原理是利用抗原抗體結(jié)合的可逆性,但在合適濃度時(shí)又可達(dá)到結(jié)合和解離的穩(wěn)定期,那么親和力更強(qiáng)的抗體自然就能更有效的結(jié)合抗原了。一般結(jié)合的解離使用最多的就是SPR和BLI技術(shù)了,可以高精度或高通量的測(cè)抗原/抗體、受體/配體的親和力。

利用已知的抗原進(jìn)行標(biāo)記(抗原A),作為對(duì)照,實(shí)驗(yàn)組加入樣本(抗原B)及標(biāo)記抗原,與對(duì)照組相比,顯色低,則該抗原A與抗原B競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗體,這種方法一般用于抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原。

包被抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)法呢,一般用于ADA,競(jìng)爭(zhēng)、非競(jìng)爭(zhēng)抗體鑒定/篩選,抗體的競(jìng)爭(zhēng)篩選是有效的免疫原性檢測(cè)手段之一。

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