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WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣

閱讀:2667      發(fā)布時(shí)間:2023-8-21
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在做 Western blot 實(shí)驗(yàn)時(shí),你一定會(huì)遇到各式各樣的條帶,最常見的就是條帶跑歪了,如凹型條帶、凸型條帶、斜條帶、條帶拖尾等。如何更好的做好WB實(shí)驗(yàn),讓我們一起來看看WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣吧!

一、凹凸條帶的原因和解決辦法

可能原因:可能是由于膠未配好(凝膠未能wan聚合,膠中有顆?;驓馀?,凝膠未冷卻好,),也可能是電壓過高。

解決方法:正確添加質(zhì)量合格且未過期的 AP 及 TEMED;過濾配膠的試劑保證配膠過程中膠內(nèi)無氣泡;凝膠冷卻好后再上樣;降低電壓。

二、條帶出現(xiàn)黑點(diǎn)或黑斑的原因和解決辦法

可能原因:試劑污染,抗體結(jié)合到封閉劑。

解決方法:使用新鮮配置的試劑;過濾封閉液;選用其他類型封閉液。

三、條帶中出現(xiàn)邊緣規(guī)則的白圈的原因和解決辦法

可能原因:轉(zhuǎn)膜時(shí)膜和膠中間有氣泡,或抗體在膜上未均勻分散。

解決方法:制備轉(zhuǎn)膜凝膠時(shí)用玻棒趕去氣泡;使用搖床孵育抗體。

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