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polyplus jetPRIME®轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書

閱讀:14736      發(fā)布時(shí)間:2023-5-15
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第0天:細(xì)胞接種

→根據(jù)下表在V mL細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)種子細(xì)胞

每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量

image.png

*對(duì)于特定的細(xì)胞類型或懸浮細(xì)胞,請(qǐng)參考完整的方案。

第1天:轉(zhuǎn)染

→在血清存在的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染

→僅使用jetPRIME®緩沖液

→以60-80%的融合率轉(zhuǎn)染細(xì)胞

8-3.png

每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量

image.png

第2-3天:測(cè)量基因表達(dá)

優(yōu)化方向:

(1)測(cè)試不同的DNA量:X、0.5X和1.5X。

(2)測(cè)試不同的DNA/jetPRIME®比例,1:2至1:3。

每個(gè)孔、盤子或燒瓶的數(shù)量image.png

對(duì)于HEK-293和HeLa細(xì)胞,可以將DNA量減少到0.5倍,并使用1:2 DNA/jetPRIME®比例。

提高敏感細(xì)胞細(xì)胞活力的技巧:

(1)轉(zhuǎn)染后4小時(shí)更換培養(yǎng)基。

(2)將DNA量減少到0.5倍,同時(shí)保持之前使用的DNA/jetPRIME®比例。

(3)在較早的時(shí)間點(diǎn)(例如轉(zhuǎn)染后24小時(shí)而不是48小時(shí))分析轉(zhuǎn)染。

(4)檢查靶基因是否影響細(xì)胞活力。

良好的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)踐:

(1)適當(dāng)儲(chǔ)存jetPRIME®(5±3°C)。

(2)確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前傳代兩次以上且少于20次。

(3)丟棄過(guò)度流暢的細(xì)胞。

(4)定期檢查支原體污染情況。

(5)使用報(bào)告基因來(lái)建立和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。

(6)血清質(zhì)量可能會(huì)嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)染效率。購(gòu)買新一批血清時(shí)或胰蛋白酶檢查細(xì)胞活力以及轉(zhuǎn)染效率。


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