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親和層析填料的應(yīng)用原理及其優(yōu)勢

閱讀:1450      發(fā)布時(shí)間:2023-5-8
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親和層析填料是根據(jù)生物分子間親和力具有專一性而設(shè)計(jì)的層析技術(shù),是生物大分子的生物學(xué)特異性,這種專一性的親和力體現(xiàn)在,激素和受體抗原和抗體、酶蛋白和輔酶、酶和酶抑制劑(或配體)等。以抗原和抗體為例,在一定條件下,抗原抗體能緊密地結(jié)合在一起形成復(fù)合物。將復(fù)合物的一方固定在不溶性載體上,則可從溶液中專一地分離和提純另一方。與其他純化方法相比,親和層析純化作用強(qiáng),效果好,最重要的是,純化速度快,有時(shí)僅一步即可達(dá)到純化的目的。

親和層析填料具有三大優(yōu)點(diǎn):

1.純化步驟少、純化純度高。親和層析填料一種極為有效的分離蛋白質(zhì)的方法,通常情況下,一步法即可達(dá)到純化的目的,更為關(guān)鍵的是,純化的純度高。  

2.對不穩(wěn)定蛋白純化更有利。親和層析填料有效的進(jìn)行物質(zhì)純化,對生物分子吸附和分離具有選擇性,純化倍數(shù)。同時(shí),在純化過程中,蛋白得到濃縮,結(jié)合到親和配基后,性質(zhì)更穩(wěn)定,活性回收率更高、純化步驟更少、純化時(shí)間更短、對不穩(wěn)定蛋白的純化有利。

3.分離效果優(yōu)良(較大容量載體同樣)。除特異性的吸附外,仍然會(huì)因分子的錯(cuò)誤認(rèn)別和分子間非選擇性的作用力而吸附一些雜蛋白質(zhì),另外在洗脫過程中配體不可避免的脫落進(jìn)入分離體系。親和層析填料正確地選擇合適的配體和結(jié)合方式,對獲得具有優(yōu)良分離效果和較大容量的載體同樣具有重要作用。能與分離物質(zhì)牢固、特異和可逆結(jié)合的物質(zhì)都可以作為配體。選擇配體有兩個(gè)條件:第一是生物大分子與配體間具有合適的親和力,親和力太強(qiáng),洗脫條件劇烈,易造成生物大分子失活,親和力太小,解離容易,結(jié)合率不高。第二是配體要具有雙重功能,既有可牢固與載體結(jié)合的基團(tuán),結(jié)合后又不影響生物大分子與配體間的親和力。


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