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PCR/qPCR耗材選擇——一般特征篇

閱讀:1343      發(fā)布時(shí)間:2023-2-13
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1)規(guī)格

常見(jiàn)的PCR/qPCR耗材規(guī)格如下

管:0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

96 孔板:0.2 mL, 0.1 mL

384 孔板:0.02 mL

PCR/qPCR/板的規(guī)格決定了反應(yīng)體積。如果加入過(guò)多的樣品,一方面會(huì)導(dǎo)致熱傳導(dǎo)的效率下降,另一方面會(huì)導(dǎo)致樣品溢出或者污染;如果加入的樣品過(guò)少,又會(huì)因?yàn)轭l繁的熱循環(huán)導(dǎo)致水分蒸發(fā),進(jìn)而導(dǎo)致體系不足、樣品損耗,實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)誤差或者無(wú)結(jié)果。并且選用的耗材需根據(jù)PCR儀的加熱模塊來(lái)決定,以求最DA程度的熱傳導(dǎo)的匹配。

2)高度

PCR/qPCR/板有不同高度的選擇,其中“低容(low profile"的管/板意思是說(shuō),與普通的管/板相比,它們的高度更低,這樣的設(shè)計(jì)能最大成大的減少反應(yīng)體系上方的空間,減少了蒸發(fā)對(duì)體系的影響,并且提高了熱傳導(dǎo)的效率。因此更推薦優(yōu)先使用低容的管/板。

3厚度

PCR/qPCR/板要求管壁厚度的一致性,可以保證熱傳導(dǎo)的一致性。除標(biāo)準(zhǔn)厚度外,目前超薄壁的耗材也受到了廣泛的應(yīng)用,這種超薄壁的管/板管壁厚度約是標(biāo)準(zhǔn)版的50%,可以進(jìn)一步減少熱障,使熱傳遞進(jìn)行更快,PCR反應(yīng)更加穩(wěn)定。

4透明度

對(duì)于普通PCR來(lái)說(shuō),管材的透明度對(duì)擴(kuò)增結(jié)果無(wú)影響。對(duì)于qPCR來(lái)說(shuō),管身應(yīng)選擇不透明的白色或者磨砂質(zhì)地的,而管蓋或者密封膜則要求具有高度的光學(xué)透性,以保證熒光信號(hào)傳遞最佳,并且降低反應(yīng)中的失真。


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