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皖儀科技液相色譜對氯霉素的檢測方法

前言

氯霉素是一種廣譜抗生素，最初由委內(nèi)瑞拉鏈霉菌產(chǎn)生。它在1947年被首次分離成功，并在次年開始通過化學(xué)方法合成。氯霉素對多種需氧革蘭氏陽性細(xì)菌和革蘭氏陰性細(xì)菌、厭氧的擬桿菌、立克次氏體、衣原體及菌質(zhì)體都有抑制作用，尤其對沙門氏菌屬、流感桿菌和擬桿菌屬等有良好的抗菌能力。由于它的特性，在感染性疾病的治療中發(fā)揮著重要的作用。然而，氯霉素的使用也伴隨著一些副作用。氯霉素在人體內(nèi)蓄積的藥物濃度達(dá)到一定量時會產(chǎn)生多種急慢性中毒，并導(dǎo)致再生障礙性貧血癥和溶血性貧血等疾病，導(dǎo)致身體不能制造紅血球、白血球和血小板，同時還會引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎、神經(jīng)性耳聾以及嚴(yán)重失眠。還可引發(fā)中毒性精神病，主要表現(xiàn)為幻視、幻聽、定向力喪失、精神失常等。因氯霉素的毒副作用較大，聯(lián)合國糧農(nóng)組織、歐盟、美國均明確規(guī)定在食用動物中禁止使用氯霉素。2019年，在我國，氯霉素也被列入食品動物中禁止使用的藥品。因此，對氯霉素的檢測很有必要。

本篇介紹的分析方法，參考的是標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的測定，采用皖儀科技高效液相色譜儀配置紫外檢測器測試。實驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適應(yīng)性測試峰型良好，目標(biāo)峰周圍無雜峰。氯霉素線性良好，R值在0.999以上，保留時間重復(fù)性RSD為0.116%，峰面積重復(fù)性RSD為0.378%。氯霉素的檢出限測試結(jié)果良好，濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，三倍信噪比作為檢出限計算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。以上各項數(shù)據(jù)結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)方法中對儀器的要求。

1 方法原理

高效液相色譜-紫外檢測器測定，外標(biāo)法定量。

2  儀器配置及實驗方法

2.1 儀器配置

表1 皖儀液相配置清單表

2.2 實驗方法

2.2.1 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品制備

表2 試劑及標(biāo)準(zhǔn)品清單

2.2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取10mg左右（精確到0.1mg）氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，配成1000mg/L左右的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-18℃冰箱保存。

2.2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)使用液: 分別吸取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，用甲醇稀釋為100mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液。需現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線：將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液用0.5mol/L高氯酸溶液稀釋濃度為0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L 系列濃度工作曲線。

2.2.2 色譜條件

表3 色譜條件

3 實驗結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性

圖1 濃度為5mg/L氯霉素譜圖

說明：由圖可知，氯霉素峰型良好，目標(biāo)峰周圍無雜峰，滿足實驗要求。

3.2 線性關(guān)系

圖2 氯霉素標(biāo)曲

說明：本次測試的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度為0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、5 mg/L。由上圖可知，氯霉素線性方程為y=131.23850x+3.16337。R值為0.99978，線性良好，滿足實驗要求。

3.3  重復(fù)性

圖3 濃度為0.5mg/L的氯霉素6針重復(fù)性譜圖

表4 氯霉素6針重復(fù)性數(shù)據(jù)

說明：根據(jù)上表數(shù)據(jù)可知，氯霉素保留時間RSD為0.116%，峰面積RSD為0.378%。重復(fù)性均小于0.4%,滿足實驗要求。

3.4 檢出限

圖4 濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品譜圖

說明：根據(jù)上圖數(shù)據(jù)所示，濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，三倍信噪比為檢出限計算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。滿足實驗要求。

3.5 注意事項

1. 高氯酸具有強酸性和揮發(fā)性，配制溶液時注意在通風(fēng)櫥中進行。

2. 高氯酸遇光會分解，在配制標(biāo)曲及實驗時進樣小瓶需使用棕色的。

4 總結(jié)

本篇介紹的分析方法，參考的是標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10386-2004畜禽肉中氯霉素的測定，采用皖儀科技高效液相色譜儀配置紫外檢測器測試。實驗結(jié)果顯示，系統(tǒng)適應(yīng)性測試峰型良好，目標(biāo)峰周圍無雜峰。氯霉素線性良好，R值在0.999以上，保留時間重復(fù)性RSD為0.116%，峰面積重復(fù)性RSD為0.378%。氯霉素的檢出限測試結(jié)果良好，濃度為0.05mg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，三倍信噪比作為檢出限計算可知氯霉素儀器檢出限為0.003mg/L。以上各項數(shù)據(jù)結(jié)果滿足標(biāo)準(zhǔn)方法中對儀器的要求。