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應(yīng)用簡報(bào) | 安捷倫Vaya手持拉曼光譜儀如何輕松實(shí)現(xiàn)商用寡核苷酸原料的穿包裝ID認(rèn)證?

時間:2023-5-31 閱讀:527
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寡核苷酸藥物(Oligonucleotide drug,又名小核酸藥物)直接作用于疾病的遺傳物質(zhì)(DNA/RNA)靶點(diǎn)發(fā)揮治療作用,且具有高特異性和長藥效等優(yōu)勢,在過去的幾年里其需求劇增,正在承受壓力以滿足應(yīng)用需求和質(zhì)量要求。

 

當(dāng)前 cGMP 環(huán)境下強(qiáng)制對寡核苷酸原料進(jìn)行入場認(rèn)證,篩查劣質(zhì)或摻假的原料,是防止錯誤原料引入,保持質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的第一道關(guān)卡。

 

合成寡核苷酸的原料——亞磷酰胺,通常儲存在棕色玻璃瓶中。在本應(yīng)用簡報(bào)中,介紹了 Agilent Vaya 手持拉曼光譜儀帶包裝鑒別幾種市售的用于合成寡核苷酸的亞磷酰胺。該分析的目的是證明拉曼光譜是在 cGMP 制造環(huán)境中透過透明和不透明容器識別/區(qū)分生物制藥材料的有效解決方案。

 

實(shí)驗(yàn)部分

在 Sigma Aldrich 購置幾種低聚亞磷酰胺,均為棕色玻璃瓶包裝。實(shí)驗(yàn)的流程為:

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購買樣品如下:

 

  • DMT-2’O-Methyl-rA (bz) Phosphoramidite

  • DMT-dA (bz) -CPG

  • DMT-dG (ib) Phosphoramidite

  • DMT-dT Phosphoramidite

  • DMT-dA (bz) Phosphoramidite

圖片

五種低聚亞磷酰胺拉曼光譜

 

 

結(jié)果與討論

從譜圖結(jié)果中可以看出 s. DMT-dG(ib) Phosphoramidite 和 DMT-dA(bz)-CPG 這兩種原料在 1000cm-1 和 1500cm-1 處的特征峰與其他三個原料有明顯的差異,可以比較容易的分辨出來,而其余的三種原料則有非常相近的譜圖,因此當(dāng)這幾種原料混淆或裝錯時就很有可能會出現(xiàn)假陽性的情況。

 

于是在原有模型的基礎(chǔ)上,利用 Vaya 獨(dú)特的相似物區(qū)分功能掃描添加相似原料的譜圖,以增強(qiáng)模型計(jì)算,將相似原料譜圖區(qū)分開。能夠區(qū)分相似物的原理在于 Vaya 智能的模型軟件計(jì)算系統(tǒng),Vaya 采用相關(guān)系數(shù)(R2)和線性模型系數(shù)(LMC)雙重模型算法進(jìn)行決策,R2 是常用的未知物鑒別指標(biāo),以確認(rèn)待測樣品與模型的相似度,LMC 則提供額外的檢查以增強(qiáng)決策的特異性,它基于將額外的光譜(即分析物光譜)添加到模型中并觀察其 LMC 得分對模型的影響來進(jìn)行增強(qiáng)計(jì)算。

 

圖片

以五種原料的模型逐一進(jìn)行驗(yàn)證(未添加相似物料)

以五種原料的模型逐一進(jìn)行驗(yàn)證(添加相似物料)

 

從測試結(jié)果中可以得出以下結(jié)論:

1

此次實(shí)驗(yàn)購置的亞磷酰胺原料均具有比較清晰的拉曼特征峰,適宜利用拉曼光譜儀進(jìn)行分析。

2

Agilent Vaya 手持拉曼光譜儀可以穿透棕色玻璃瓶包裝對亞磷酰胺類原料進(jìn)行穿包裝測試。

3

部分亞磷酰胺類原料具有比較相似的拉曼信號,常規(guī)的建模測試流程有誤識別的風(fēng)險(xiǎn),需要利用添加相似物功能對其進(jìn)行區(qū)分。

 

結(jié)語

得益于 Vaya 手持拉曼光譜儀優(yōu)異的硬件和軟件系統(tǒng),可以輕松穿透包裝鑒別物料,同時,搭載的智能雙模型系數(shù)算法可以有效區(qū)分相似物料,為原輔料 ID 認(rèn)證保駕護(hù)航。這些性能已在寡核苷酸類生物制藥原料的檢測中得到了印證。

 

我們可以期待 Vaya 在未來應(yīng)用場景中有更多突出的表現(xiàn)。

 

 

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