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生物素概述和生物素化3種試劑的蛋白質(zhì)標(biāo)記等特性

閱讀:4460      發(fā)布時間:2022-7-22
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一、生物素簡介
 
生物素(biotin,B)分子量244.31D.生物素分子有兩個環(huán)狀結(jié)構(gòu),其中Ⅰ環(huán)為咪唑酮環(huán),是與親和素結(jié)合的主要部位;Ⅱ環(huán)為噻吩環(huán),C2上有一戊酸側(cè)鏈,其末端羧基是結(jié)合抗體和其他生物大分子的結(jié)構(gòu),經(jīng)化學(xué)修飾后,生物素可成為帶有多種活性基團的衍生物——活化生物素。
 
生物素是水溶性B族維生素,以前稱為維生素H或輔酶R。它是羧化酶的輔酶,其與纈氨酸、脂肪酸、異亮氨酸等的合成有關(guān)。
 
連接各種反應(yīng)基團的生物素被用來標(biāo)記蛋白質(zhì)或抗體。生物素標(biāo)記的蛋白或抗體可用鏈霉素耦聯(lián)的HRP或磁珠進行檢測或純化。
 
 
二、生物素化試劑包含3種:
 
a. 伯胺反應(yīng)性生物素化試劑
 
伯胺生物素化試劑基于水溶性分為兩組:NHS-酯和磺基-NHS-酯。
 
1.NHS-酯的特點:
 
蛋白質(zhì)標(biāo)記-生物素化抗體或其它蛋白質(zhì),用于檢測或純化;
 
細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記-膜滲透性,可用于標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)部;
 
胺反應(yīng)性-與伯胺(-NH2)反應(yīng),例如賴氨酸的側(cè)鏈或N端伯胺;
 
溶解性-水不溶性,必須溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
 
2.磺基-NHS-酯的特點:
 
蛋白質(zhì)標(biāo)記-生物素化抗體,用于固定、純化或檢測;
 
細(xì)胞表面標(biāo)記-不穿透質(zhì)膜,僅生物素化細(xì)胞的表面蛋白;
 
胺反應(yīng)性-與伯胺(-NH2)反應(yīng),例如賴氨酸的側(cè)鏈或N端伯胺;
 
溶解性-易溶于水,可用于不能耐受有機溶劑的應(yīng)用。
 
b. 巰基反應(yīng)性生物素化試劑
 
巰基反應(yīng)性生物素化試劑分為兩類:生物素-HPDP和碘乙?;?LC-生物素。
 
1.生物素-HPDP的特點:
 
蛋白質(zhì)標(biāo)記-生物素化抗體或其它蛋白質(zhì);
 
巰基反應(yīng)性-與巰基(-SH)反應(yīng),例如半胱氨酸(C)的側(cè)鏈;
 
吡啶基二硫醇活化-在pH6.5至7.5的緩沖液如PBS中反應(yīng);
 
可逆-形成二硫鍵,其可以使用DTT或其它還原劑切割;
 
溶解性-水不溶性,必須溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
 
2.碘乙酰基-LC-生物素的特點:
 
蛋白質(zhì)標(biāo)記-生物素化抗體或其它蛋白質(zhì);
 
細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記-膜可透過,可用于標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)部;
 
巰基反應(yīng)性-與巰基(-SH)反應(yīng),例如半胱氨酸(C)的側(cè)鏈;
 
碘乙酰激活-反應(yīng)在pH7.5至8.5的Tris或硼酸鹽緩沖液中避光進行;
 
不可逆-形成不可逆性硫醚鍵,間隔臂不能被切割;
 
溶解性-水不溶性,必須溶解在DMSO或DMF中,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
 
c. 羰基反應(yīng)性生物素化試劑
 
生物素-酰肼是通常用于靶向聚糖和糖蛋白的蛋白修飾試劑。
 
生物素-酰肼的特點
 
糖蛋白標(biāo)記-在唾液酸殘基上生物素化糖基化蛋白,用于檢測或純化;
 
細(xì)胞表面標(biāo)記-生物素化和分離細(xì)胞表面糖蛋白;
 
醛反應(yīng)性-與糖基高碘酸鹽氧化形成的醛反應(yīng);
 
酰肼活化-在pH值為4~6的緩沖液如乙酸鈉中進行反應(yīng);
 
不可逆的-形成半不可逆性腙鍵;間隔臂不能被切割;
 
溶解性-通常溶于DMSO,然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
 

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