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總膽固醇(T-CHO)測試盒說明書  

  一、試劑組成及配制(100 管/96 樣):           

  二、操作過程:

1、樣本處理:①、血清(漿)：直接測定，如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。②、培養(yǎng)液樣本：吸取培養(yǎng)液，1000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清測定。

[注]：一般建議細(xì)胞密度在 100 萬個(gè)/ml 以上。③、組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的勻漿介 質(zhì)，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液待測。

[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本，勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取。 2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本，勻漿介質(zhì)可統(tǒng)一用無水乙醇進(jìn)行提取。④、細(xì)胞樣本：A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出，1000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，棄上清液，留細(xì)胞沉 淀；用等滲緩沖液（推薦 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液）清洗 1～2 次，同樣 1000 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，棄上清液，留細(xì)胞沉淀；B、細(xì)胞破碎:加入 0.2～0.3ml 的勻漿介質(zhì)（推薦 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理 鹽水）進(jìn)行勻漿，冰水浴條件下超聲破碎(功率 300W，3～5 秒/次，間隔 30 秒,重復(fù) 3～ 5 次)或手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采用裂解液裂解( 推薦 TritonX-100,1～2%,裂解 30～40 分鐘)，裂解好的液體不離心直接測定。[注]：一般建議收集的細(xì)胞密度在 100 萬個(gè)/ml 以上。破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎* 

2、操作表： 
普通試管操作，分光光度計(jì)比色 空白管校準(zhǔn)管樣本管蒸餾水（μl）10  5.17mmol/L 校準(zhǔn)品（μl） 10 樣本（μl）  10工作液（μl）100010001000
 混勻，37℃孵育 10 分鐘，波長 510nm，光徑 0.5cm，蒸餾水調(diào)零，測定各管吸光度值。

 三、計(jì)算公式及舉例:

1、血清等液體樣本計(jì)算公式:膽固醇量=(mmol/L) 樣本OD值 - 空白OD值 校準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 校準(zhǔn)品濃度´(5.17mmol/L)

 a、取正常人血漿2.5μl，按操作表操作，得空白管吸光度0.012，校準(zhǔn)管吸光度0.141，樣本管 

吸光度0.103，則計(jì)算如下： 總膽固醇含量	樣本OD值 - 空白OD值	校準(zhǔn)品濃度=	´= 0.103 - 0.012 ´ 5.17 = 3.6270mmol / L

(mmol/L)校準(zhǔn)OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)0.141 - 0.012

 b、取大鼠血漿2.5μl，按操作表操作，得空白管吸光度0.012，校準(zhǔn)管吸光度0.141，樣本管吸 

光度0.053，則計(jì)算如下： 總膽固醇含量	樣本OD值 - 空白OD值	校準(zhǔn)品濃度=	´= 0.053 - 0.012 ´ 5.17 = 1.6432mmol / L

(mmol/L)校準(zhǔn)OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)0.141 - 0.012


2、組織、細(xì)胞計(jì)算公式: 膽固醇含量 樣本OD值 - 空白OD值	校準(zhǔn)品濃度=	´ 待測樣本蛋白濃度¸

(mmol/gprot)校準(zhǔn)OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)(gprot / L)

 a、取10%小鼠肝勻漿2.5μl，按操作表操作，得空白管吸光度0.012，校準(zhǔn)管吸光度0.141，樣 本管吸光度0.043，同時(shí)測得10%小鼠肝勻漿蛋白濃度為12.0121gprot/L，則計(jì)算如下： 

總膽固醇含量	樣本OD值 - 空白OD值	校準(zhǔn)品濃度=	´待測樣本蛋白濃度¸

(mmol/gprot)校準(zhǔn)OD值 - 空白OD值(5.17mmol/L)(gprot / L)

= 0.043 - 0.012 ´ 2.26 ¸12.0121 = 0.1034mmol / gprot0.141 - 0.012 

四、測定原理： 

膽固醇酯⎯ ⎯CE   ®  膽固醇+ 脂肪酸

 膽固醇CO	4+  O 2    ⎯ ⎯ ®  Δ	膽甾烯酮+ H 2 O 2

H 2 O 2   + 4 - AAP+ 3,5 - DHBS⎯ P⎯O⎯D  ® 紅色醌化物+ H 2 O
生成的醌類化合物顏色的深淺與膽固醇的含量成正比，分別測定校標(biāo)準(zhǔn)管和樣本管的吸光度 值，計(jì)算膽固醇的含量。 

五、產(chǎn)品描述： 本試劑盒采用 COD-PAP 法配制，用于體外測定總膽固醇含量。適用于各型分光光度計(jì)。

 六、性能指標(biāo)：

1、試劑空白管吸光度≤0.100（0.5cm 光徑）。

2、線性：0～10.34mmol/L范圍內(nèi)，r2＞0.995。

3、精密度：CV≤3%，批間相對(duì)極差≤5%。

4、穩(wěn)定性：原裝試劑盒在 2℃～8&#84

51;避光保存，有效期為 12 個(gè)月。開啟后 2℃～8℃避光保存，可 穩(wěn)定 3 個(gè)月。

七、注意事項(xiàng)：

 1、本產(chǎn)品僅用于科研，不得用于研究診斷，切勿服用。 

2、樣品含量如超出檢測范圍上*，可用生理鹽水稀釋樣本后進(jìn)行測定，測定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

 3、試劑防止葡萄糖、膽固醇等試劑的污染。

 4、試劑與樣本量可按照比色杯體積，按照 1：100 的比例增減。        

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