液相色譜是世界各地實驗室使用的流行純化技術(shù)。如果系統(tǒng)設(shè)置和操作正確，它可以立即從混合物中分離出所需的化合物。學(xué)習(xí)如何使用和制備緩沖液和溶劑是能提高系統(tǒng)性能的重要技巧之一。準(zhǔn)確制備和正確選擇緩沖液對于在液相色譜中獲得可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。
一、了解您的化合物
如果您正在尋找混合物中的特定化合物，您應(yīng)該使用最能將您的分析物與其他分析物分開的緩沖液/溶劑組合。例如，了解極性和溶解度（極性或非極性）、電離、您正在尋找的紫外吸光度將有助于指導(dǎo)您使用特定的色譜柱和溶劑組。
二、純度
使用較低等級且成本較低的試劑來制作緩沖液以節(jié)省一些錢是很誘人的，但從長遠(yuǎn)來看，它最終會變得更加昂貴。與含有最少或不含雜質(zhì)的 HPLC 級試劑相比，純度較低的試劑會導(dǎo)致不需要的峰和嘈雜的基線。它們還會對您的系統(tǒng)造成嚴(yán)重破壞，造成阻塞，從而導(dǎo)致系統(tǒng)故障和更昂貴的維護(hù)費用。所有試劑和溶劑，包括您使用的水，都應(yīng)該是最高質(zhì)量的 HPLC 級，以減少緩沖液中不需要的微粒。高級試劑的成本可能比低級試劑略高，但純度的差異是值得的。HPLC 級試劑還有助于獲得更一致的結(jié)果并保持系統(tǒng)平穩(wěn)運行。
即使是使用高純度實驗級別的溶劑，也需要在進(jìn)入色譜系統(tǒng)前進(jìn)行過濾，采用恒譜生溶劑過濾器可以有效過濾化學(xué)污染等雜質(zhì)進(jìn)入系統(tǒng)，通用于流動相或輸液泵，配套用于外徑1/8英寸或1/16英寸的管子，放置于流動相溶劑瓶中，過濾雜質(zhì)。過濾后，溶劑應(yīng)儲存在有蓋的容器中，以防止被灰塵或其他不需要的材料污染。
四、避免氣泡
在與您的系統(tǒng)一起使用之前對緩沖液進(jìn)行脫氣或真空過濾可以最大限度地減少流動相中的空氣和微粒。如果液相色譜系統(tǒng)中發(fā)生流動相脫氣，主要會影響泵和檢測器。為了解決這個問題，在將新制備的流動相泵入 HPLC 系統(tǒng)之前進(jìn)行脫氣，連同在線脫氣器，應(yīng)*脫氣以去除所有溶解的氣體。*的脫氣形式是用氦氣或其他低溶解度氣體鼓泡。如果該方法可用，建議在整個分析過程中以非常低的水平持續(xù)對流動相進(jìn)行脫氣。
五、定期檢查
細(xì)菌幾乎可以在任何溶液中適應(yīng)和生長，甚至是有機(jī)溶劑，具體取決于濃度。為防止細(xì)菌生長堵塞色譜柱篩板，每次制備新的緩沖液批次時更換緩沖液容器，檢查緩沖液瓶/袋是否有細(xì)菌生長跡象。搖晃或攪拌時出現(xiàn)渾濁的溶液應(yīng)丟棄。使用抑菌劑（例如 0.02% NaN3）處理會延長溶液的儲存時間，盡管這些試劑可能會影響您的色譜圖。
六、新鮮配置
恒譜生建議稀釋緩沖液的有效期為一周。這種做法可確保緩沖液的 pH 值不受長期儲存的影響，并且不會出現(xiàn)微生物生長。pH 值變化和微生物生長都會影響您的色譜運行并導(dǎo)致運行之間的不一致。雖然您可以添加穩(wěn)定劑，例如焦亞硫酸鈉，但這些試劑會影響光學(xué)和色譜結(jié)果。
最后，液相色譜法可能是一項具有挑戰(zhàn)性的技術(shù)。遵循上述關(guān)于如何準(zhǔn)備和使用緩沖液進(jìn)行純化的提示，將有助于使每次運行的一致性和可重復(fù)性。
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