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外泌體的主流共識---電鏡、NTA和WB實驗
閱讀：998 發(fā)布時間：2023-8-11外泌體的形狀是杯狀或茶托形，可以通過電鏡觀察形態(tài)進行初步確定，外泌體的粒徑大小在30-120nm左右，通過NTA可以檢測到粒徑大小，外泌體本身具有一些特殊的標志蛋白，通過WB可以檢測出來。
目前鑒定外泌體主要包括三方面實驗，但是三方面實驗在鑒定外泌體的存在、數量和完整性上分別存在一些缺陷。
可以直觀的看到粒子的形態(tài)，因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性，但是包括支原體、鐵蛋白聚團、聚乙二醇蛋白聚團、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似，并且電鏡只能展示局部景象。因此，電鏡成像無法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子，且不能反映樣品中的外泌體數量。
是一種測算粒子群體直徑分布和粒子數量的計算方法，它通過光學原理感知粒子的存在，因此可以確認外泌體樣品中的“外泌體"數量和直徑的群體特征，但是無法確認檢測到的粒子是否為外泌體，不能反映粒子形態(tài)，無法將外泌體和其他納米粒子區(qū)分開。因此NTA不能確認外泌體的真實存在和外泌體的完整性。
可以鑒定外泌體中存在的特定蛋白，WB檢測外泌體標志蛋白可以說明外泌體成分的存在。但是目前的這些標志物蛋白只是會在外泌體里富集，而并不是外泌體所有的，諸如CD63、ALIX等在細胞中都有，在一些細胞碎片、溶酶體、胞內體中也大量存在。因此，WB僅能證實外泌體成分的存在，無法確認外泌體的數量和完整性。
因此，通過三個實驗的相互佐證來確認外泌體的存在、數量和完整性。當且僅當三個實驗結果都正常（即電鏡看到經典結構，WB檢測到外泌體標志物的富集，NTA測算直徑分布符合外泌體定義），才能確認研究者成功的分離純化了外泌體，基于這一成功的分離方法所得到的后續(xù)研究結果才能認為是外泌體相關的研究結果。其實，好的鑒定方法應當是免疫電鏡結合NTA，但是免疫電鏡的難度過高，因此最終形成了電鏡、NTA和WB三個實驗鑒定外泌體的主流共識。