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使用Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么?

閱讀:1411      發(fā)布時(shí)間:2022-9-13
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   Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑在細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞識(shí)別、抗體蛋白研發(fā)等領(lǐng)域廣泛使用,通常可以直接購(gòu)買或者過(guò)實(shí)驗(yàn)室中DIY配制。Lipofectamine、fugene、磷酸鈣、是較為常見(jiàn)的轉(zhuǎn)染試劑,其實(shí)目前市場(chǎng)上的轉(zhuǎn)染試劑盒針對(duì)某些轉(zhuǎn)染進(jìn)行了優(yōu)化,使用起來(lái)較為方便。
  
  由于省掉了電轉(zhuǎn)杯,轉(zhuǎn)染過(guò)程也更為簡(jiǎn)化:只需將細(xì)胞和核酸吸入Neon移液器吸頭中,再插入到移液器吸頭架上,并按“Start”即可。轉(zhuǎn)染過(guò)后,直接將細(xì)胞加入培養(yǎng)容器中。既沒(méi)有繁瑣的移液,也不需要清洗電轉(zhuǎn)杯。而且,通用的試劑盒適用于所有細(xì)胞類型,不用購(gòu)買多個(gè)試劑盒,也無(wú)需鑒定最佳緩沖液。當(dāng)然,一次性使用的24K金電極吸頭成本不低。因多次使用會(huì)導(dǎo)致金包被變薄,改變吸頭的電導(dǎo)率,所以每個(gè)吸頭最多只能使用兩次。
  
  使用Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑需要注意什么?
  1、轉(zhuǎn)染操作時(shí),以細(xì)胞融合度達(dá)90%-95%為佳;
  2、使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率;
  3、制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑;
  4、轉(zhuǎn)染的時(shí)候培養(yǎng)基中不能添加抗生素;
  5、試劑應(yīng)該在4度保存,要注意避免多次反復(fù)長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)蓋;
  6、初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉(zhuǎn)染效率。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
  
  轉(zhuǎn)染后需要進(jìn)行終止嗎?
  不需要。脂質(zhì)體復(fù)合物可以穩(wěn)定存在6個(gè)小時(shí)。如果在進(jìn)行轉(zhuǎn)染前沒(méi)有進(jìn)行細(xì)胞換液,為了保證細(xì)胞正常生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng),需要在4~6小時(shí)后換用新的培養(yǎng)基。但如果轉(zhuǎn)染之前已進(jìn)行過(guò)換液,則在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后不需要進(jìn)行再次換液。

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