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大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明

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  以下是關(guān)于大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明綜合整理:

  BS-3649 大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒

  一、實(shí)驗(yàn)原理

  采用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中HMGB-1含量。通過(guò)包被抗體捕獲目標(biāo)蛋白后,依次加入檢測(cè)抗體和酶標(biāo)記物形成復(fù)合物,最終通過(guò)TMB顯色反應(yīng)測(cè)定濃度?。

  二、樣本處理要求

  血清?:室溫凝固10-20分鐘后2000-3000rpm離心20分鐘?

  血漿?:需使用EDTA/檸檬酸鈉抗凝,離心后取上清?

  組織勻漿?:按重量加入PBS勻漿后離心?

  保存條件?:建議分裝凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融?

  三、試劑盒組成

  包含包被板、標(biāo)準(zhǔn)品(濃度通常為0-160μg/L)、生物素標(biāo)記抗體、鏈霉親和素-HRP、顯色液(TMB)及終止液等?。不同規(guī)格試劑盒組分體積存在差異(如48孔/96孔配置)?。

  四、操作步驟

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?:按說(shuō)明書梯度稀釋?

  加樣順序?:依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本→檢測(cè)抗體→酶結(jié)合物?

  溫育條件?:37℃反應(yīng),具體時(shí)間參照不同試劑盒要求(通常30-60分鐘)?

  顯色終止?:加入TMB顯色15分鐘后加終止液?

  五、注意事項(xiàng)

  濃縮洗滌液需1:20稀釋,使用前需溶解結(jié)晶?

  避免底物接觸金屬器械,顯色后需立即檢測(cè)OD值?

  計(jì)算結(jié)果時(shí)需注意樣本稀釋倍數(shù)(通常需×5)?

  六、結(jié)果計(jì)算

  在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度?。建議使用專業(yè)酶標(biāo)儀分析?。

  注:不同品牌試劑盒可能存在參數(shù)差異,請(qǐng)以實(shí)際說(shuō)明書為準(zhǔn)?。


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