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小鼠短鏈脂肪酸(SCFA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書

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  小鼠短鏈脂肪酸(SCFA)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書?

  (基于試劑盒通用操作流程整理,供參考)

  ?一、試劑盒基本信息?

  ?檢測(cè)目標(biāo)?:小鼠糞便、血清或組織樣本中的短鏈脂肪酸(如乙酸、丙酸、丁酸等)。

  ?檢測(cè)原理?:基于競(jìng)爭(zhēng)性ELISA法,通過(guò)特異性抗體結(jié)合SCFA,顯色后通過(guò)OD值定量。

  ?適用樣本?:血清、糞便懸液、腸道內(nèi)容物或組織勻漿液。

  ?二、試劑盒組成?

  組分?jǐn)?shù)量保存條件

  SCFA標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)1瓶-20℃(溶解后4℃保存)

  預(yù)包被微孔板96孔4℃

  酶標(biāo)試劑(HRP)1瓶4℃(避光)

  顯色液A/B各1瓶4℃(避光)

  終止液1瓶室溫

  樣本稀釋液1瓶4℃

  ?三、實(shí)驗(yàn)步驟?

  ?1. 樣本前處理?

  ?糞便/腸道內(nèi)容物?:取50-100mg樣本,加入1mL PBS勻漿,離心(3000rpm,10min),取上清備用。

  ?血清?:直接使用,避免反復(fù)凍融。

  ?組織?:按1:9比例(重量/體積)加入PBS勻漿,離心后取上清。

  ?2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?

  用樣本稀釋液將凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶,梯度稀釋為6個(gè)濃度(如:0、5、10、20、50、100 μmol/L)。

  ?3. 檢測(cè)流程?

  ?加樣?:

  標(biāo)準(zhǔn)品孔:每孔50μL標(biāo)準(zhǔn)品。

  樣本孔:每孔50μL待測(cè)樣本。

  空白孔:50μL樣本稀釋液。

  ?加酶標(biāo)試劑?:每孔加入50μL酶標(biāo)試劑(空白孔除外),37℃孵育30min。

  ?洗板?:甩干液體,每孔加滿洗滌液,靜置30s后棄去,重復(fù)5次。

  ?顯色?:每孔依次加入顯色液A/B各50μL,37℃避光孵育15min。

  ?終止?:每孔加入50μL終止液,立即測(cè)定OD450nm值。

  ?四、數(shù)據(jù)分析?

  ?標(biāo)準(zhǔn)曲線?:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪制曲線(推薦四參數(shù)擬合)。

  ?樣本計(jì)算?:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,計(jì)算樣本中SCFA濃度(需乘以稀釋倍數(shù))。

  ?五、注意事項(xiàng)?

  ?關(guān)鍵步驟?:

  洗板后需拍干,避免殘留液體影響OD值。

  顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制,避免過(guò)度反應(yīng)。

  ?樣本要求?:

  避免使用溶血或脂血樣本。

  糞便樣本建議新鮮采集或-80℃保存。

  ?試劑保存?:

  未開封試劑盒-20℃保存,開封后按組分要求保存。

  ?說(shuō)明?:以上內(nèi)容基于通用ELISA操作整理,具體操作請(qǐng)以試劑盒配套說(shuō)明書為準(zhǔn)。

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