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大鼠骨鈣素骨谷氨酸蛋白(OTBGP)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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  ?大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括試劑的保存、試劑的準備、操作流程及注意事項等部分?。

  試劑的保存

  試劑盒應(yīng)保存在-20℃(較長時間不用時)或2-8℃(頻繁使用時)?。

  濃洗滌液低溫保存時可能會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶?。

  試劑的準備

  試劑應(yīng)按說明儲存,用前恢復(fù)到室溫。稀釋后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存?3。

  使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器?。

  用干凈的塑料容器配置洗滌液,用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?。

  操作流程

  待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl?。

  酶標板置4℃,包被過夜?1。

  洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液洗滌3-4次?。

  陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的抗體工作液50μl(具體抗體根據(jù)實驗需求選擇)?。

  酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min?。

  再次洗板?。

  加入底物,反應(yīng)后加終止液,用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)濃度?。

  注意事項

  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)?。

  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,保質(zhì)前使用。不同批號的試劑不要混用?3。

  洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水?。

  底物A易揮發(fā),避免長時間打開蓋子;底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,且有毒,實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值?。

  加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣?。

  請嚴格按照說明書操作,以確保實驗結(jié)果的準確性。


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