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不同蛋白提取液對(duì)動(dòng)物組織全蛋白質(zhì)組鑒定的影響

閱讀:398          發(fā)布時(shí)間:2019-4-20
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目前利用高分辨質(zhì)譜儀能夠?qū)?xì)胞的全蛋白質(zhì)組進(jìn)行深度覆蓋,鑒定細(xì)胞內(nèi)接 近全蛋白質(zhì)組的蛋白數(shù)目[1-3],同時(shí)對(duì)于多種生物學(xué)過(guò)程中所涉及的翻譯后修飾 也能進(jìn)行深度的鑒定和定量[4]。質(zhì)譜儀的能力和樣品前處理是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的兩 大重要因素,本文主要分析樣品前處理過(guò)程中不同蛋白提取液對(duì)動(dòng)物組織全蛋 白質(zhì)組鑒定的影響

 

細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)提取一般采取機(jī)械和物理兩種方法相結(jié)合。傳統(tǒng)的機(jī)械裂解 如研磨、反復(fù)凍融、超聲與溶液內(nèi)剪切等對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎,為了提高蛋白提取 效率,機(jī)械裂解的同時(shí)加入表面活性劑或變性劑,破壞細(xì)胞及細(xì)胞器脂膜同時(shí) 增加蛋白溶解度[5]。常用的表面活性劑分為離子型、兩性離子型和非離子型三大 類(lèi),常添加的非離子型表面活性劑有 Triton X-100 和 NP-40 二者可使蛋白質(zhì) 小化變性;離子型的表面活性劑 SDS,可*溶解細(xì)胞膜,蛋白提取效率高, 但蛋白質(zhì)*變性失活。常用的蛋白變性劑如尿素和鹽酸胍,能夠斷裂蛋白氫 鍵,使蛋白發(fā)生不同程度的變性,同時(shí)增大疏水氨基酸殘基在水相中的溶解度。 因此根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、樣品?lèi)型以及樣品量選擇合適的機(jī)械裂解與蛋白提取液, 將有助于提高蛋白質(zhì)組研究的深度

 

液相色譜儀:EASY nLC1000(ThermoFisher Scientific)
分析柱:自制 C18 納升級(jí)噴針柱,長(zhǎng)度 15 cm,
內(nèi)徑 75 µm,粒徑 3 µm
流動(dòng)相:A,0.1% 甲酸 / 水;B, 0.1% 甲酸 / 乙腈

 

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