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前言：丙po酚是一種鎮(zhèn)靜性催眠麻醉劑，常用于誘導(dǎo)全身麻醉。誘導(dǎo)麻醉的典型劑量約為2-2.5 mg/kg，而維持麻醉則需要約 0.2 mg/kg/h 的輸注。本應(yīng)用簡報(bào)描述了血清、全血、玻璃體液、尿液或組織勻漿的分析方法。分析中樣品的最少需要量為 1.0 mL。將生物樣品堿化至堿性 pH 值，用庚烷萃取，然后對(duì)丙po酚進(jìn)行分離。

實(shí)驗(yàn)部分標(biāo)準(zhǔn)品和試劑試劑 — 庚烷和氫氧化銨 — 試劑級(jí)。標(biāo)準(zhǔn)品 — 丙po酚 (P-076 1 mg/mL) 和丙po酚 d-17(P-077 100 mcg/mL) 內(nèi)標(biāo)物購自Cerilliant。丙po酚儲(chǔ)備 QC 標(biāo)準(zhǔn)品 — (1 g - MP Biomedical) 用于制備溶于甲醇的 1 mg/mL 的工作 QC 標(biāo)準(zhǔn)品。碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液 — pH = 9.8（將 100 g 碳酸鈉和 50 g 碳酸氫鈉混合于 1000 mL 去離子水中。通過逐滴加入 5 N 的 NaOH或 10% 磷酸將 pH 調(diào)至 9.8）。隨后制備工作標(biāo)準(zhǔn)品：丙po酚 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇將 0.1 mL 的 Cerilliant儲(chǔ)備液稀釋至 10 mL）。丙po酚 d-17 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇將 1.0 mL 的Cerilliant 儲(chǔ)備液稀釋至 10 mL）。丙po酚工作 QC 標(biāo)準(zhǔn)品 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇將 0.1 mL的 MP Biomedical 工作 QC 儲(chǔ)備液稀釋至 10 mL）。在 2-8 oC 下儲(chǔ)存所有標(biāo)準(zhǔn)品，穩(wěn)定期為 2 年。對(duì)照和校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品陰性對(duì)照 — 來自美國紅十字會(huì)的不含藥的全血，使用生理鹽水(0.9%) 按 1:2 稀釋，儲(chǔ)存于 -20 oC 下，可穩(wěn)定 1 年。低對(duì)照 — (0.25 µg/mL) 在 16 × 100 mm 螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)將 25 µL工作丙po酚 QC 標(biāo)準(zhǔn)品 (10 µg/mL) 加至 975 µL 的空白血液中。高對(duì)照 1 — (0.75 µg/mL) 在 16 × 100 mm 螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)將 75 µL工作丙po酚 QC 標(biāo)準(zhǔn)品 (10 µg/mL) 加至 925 µL 的空白血液中。高對(duì)照 2—(1.5 µg/mL）在 16 × 100mm螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)將 150 µL工作丙po酚 QC 標(biāo)準(zhǔn)品 (10 µg/mL) 加至 850 µL 的空白血液中。

樣品制備1. 使用如下在 16 × 100 mm 培養(yǎng)管中的工作標(biāo)準(zhǔn)品和不含藥的血液制作校準(zhǔn)曲線：• 0.1 µg/mL-10 µL 標(biāo)準(zhǔn)品和 990 µL 血液• 0.2 µg/mL-20 µL 標(biāo)準(zhǔn)品和 980 µL 血液• 0.5 µg/mL-50 µL 標(biāo)準(zhǔn)品和 950 µL 血液• 1.0 µg/mL-100 µL 標(biāo)準(zhǔn)品和 900 µL 血液• 2.0 µg/mL-200 µL 標(biāo)準(zhǔn)品和 800 µL 血液2. 將 1 mL 樣品、陰性和陽性對(duì)照移取到帶標(biāo)記的 16 × 100 mm螺口蓋培養(yǎng)管內(nèi)。3. 向各管內(nèi)加入 100 µL 工作內(nèi)標(biāo)物。4. 加入 2 mL pH 11.0 的緩沖液。加入 0.5 mL 庚烷。5. 加蓋，渦旋（約 15 s）。6. 旋轉(zhuǎn) 15 min，然后在 3,000 rpm 下離心至少 10 min。7. 將約 200 µL 的庚烷層轉(zhuǎn)移入具有 300 µL 內(nèi)插管的 ALS 瓶內(nèi)。8. 壓合瓶蓋，轉(zhuǎn)至氣相質(zhì)譜進(jìn)行分析。

結(jié)果與討論下列標(biāo)準(zhǔn)用于確定丙po酚是否存在以及其含量。• 色譜分析結(jié)果可被接受（峰分辨率、峰對(duì)稱性、不存在交叉污染）。• 存在可用來定量和定性的選擇性離子。• 離子比例處于校準(zhǔn)確定的靶標(biāo)值的 20% 以內(nèi)。• 來自測試標(biāo)本的假定丙po酚的保留時(shí)間大約在最近一次校準(zhǔn)保留時(shí)間的± 2% 以內(nèi)。

方法限使用丙po酚和內(nèi)標(biāo)物定量離子的面積進(jìn)行定量分析。通過比較未知物和對(duì)照物的相對(duì)響應(yīng)，并比較各校準(zhǔn)物濃度的相對(duì)響應(yīng)而產(chǎn)生的校準(zhǔn)曲線來實(shí)現(xiàn)定量。陽性對(duì)照必須處于其靶標(biāo)范圍內(nèi)，陰性對(duì)照中不能有丙po酚的存在。線性 0.1–2.0 µg/mL檢測限 (LOD) 0.05 µg/mL定量限 (LOQ) 0.10 µg/mL交叉污染 在 2.0 µg/mL 的濃度測量值后未見交叉污染干擾物 未發(fā)現(xiàn)

結(jié)論本應(yīng)用簡報(bào)展示了一種使用丙po酚 d-17 作為內(nèi)標(biāo)物測定生物樣品中丙po酚的靈敏且穩(wěn)定的選擇性方法。對(duì)于丙po酚的分析，氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜的優(yōu)勢不可低估。氣相色譜四極桿離阱串聯(lián)質(zhì)譜在減少樣品基質(zhì)干擾、改善信噪比以及兼具高選擇性和靈敏性方面，為丙po酚的分析提供了可信度更高的解決方案。氣相色譜四極桿離子阱串聯(lián)質(zhì)譜分析能夠減少假陽性和假陰性，還能在所得的結(jié)果中實(shí)現(xiàn)更高的可信度。使用上文所列的優(yōu)化方法，可將快速、靶向的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法用于解決當(dāng)前法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室所面臨的丙po酚分析難題。聯(lián)合使用三種陽性對(duì)照與陰性對(duì)照可確保在未知生物樣品中進(jìn)行精確定量并排除假陰性。在多種樣品基質(zhì)中均觀察到了低至µg/mL 的檢測限。