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前言：在藥物開發(fā)過程中，需要通過一系列體外 和體內(nèi) 方法篩查有待進一步開發(fā)的潛在候選藥 物。由于基質(zhì)組分（血漿、尿液等）的存在，代謝物的體內(nèi)鑒定和定量分析面對著嚴峻的挑 戰(zhàn)，需要采用靈敏、穩(wěn)定的分析技術(shù)以便實現(xiàn)候選藥物的高通量篩查。常用的分析方法是 采用多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM) 模式下的三重四極桿質(zhì)譜儀。然而，這類系統(tǒng)的分析性能將會隨不 揮發(fā)性樣品基質(zhì)組分在離子源和離子遷移光學(xué)系統(tǒng)中的積聚而逐漸下降。因此，為維持最佳 性能可能需要頻繁清洗。

Agilent 6470 三重四極桿質(zhì)譜 (MS) 系統(tǒng)采用多項關(guān)鍵的創(chuàng)新性設(shè) 計，能夠在較寬的線性動態(tài)范圍內(nèi)對復(fù)雜樣品基質(zhì)中的目標(biāo)分析物進行靈敏、精密而穩(wěn)定的 定量分析。這些創(chuàng)新性設(shè)計包括： • 經(jīng)過優(yōu)化的離子光學(xué)元件和前級過濾器幾何尺寸，可在增加離子傳輸?shù)耐瑫r大程 度減少污染 • 彎曲的圓錐形六極桿碰撞池，能夠?qū)崿F(xiàn)高效的 MS/MS 碎裂與離子傳輸 • 具有高能量轉(zhuǎn)換打拿極和低噪音特性的離子檢測器，能夠在較寬的 m/z 范圍內(nèi)實現(xiàn) 更有效的正離子與負離子檢測 本應(yīng)用簡報證明了使用 Agilent 6470 三重四極桿質(zhì)譜儀結(jié)合 Agilent RapidFire 365 高通量 MS (HTMS) 系統(tǒng)在血漿中藥物的快速和穩(wěn)定分析中所具備的優(yōu)勢。

Agilent 6470 三重四極桿質(zhì)譜系統(tǒng) 的穩(wěn)定性評估 實驗采用分別加入 5 ng/mL 阿pu唑侖、氯 dan平及其相應(yīng)內(nèi)標(biāo) (IS)（分別為阿pu唑 侖-D5 和氯dan平-D4）混合物的沉淀豬血漿， 來評估 6470 三重四極桿質(zhì)譜儀與 RapidFire 365 HTMS 聯(lián)用系統(tǒng)的分析穩(wěn)定性。采用體 積比為 1:3 的乙腈對豬血漿進行沉淀，隨后 在 13500 rpm 下離心 5 分鐘。在加入分析 物及內(nèi)標(biāo)之前用水稀釋上清液 (1:10)。將加 標(biāo)血漿樣品轉(zhuǎn)移至 96 孔微量滴定板中，并 在進行 RapidFire/MS 分析之前使用安捷倫 PlateLoc 微孔板熱封膜機將其密封。 將 RapidFire 365 HTMS 參數(shù)優(yōu)化后得出下 列 RapidFire 方法條件： 清洗溶劑 1（緩沖液 A，流速 1.50 mL/min） 水 + 2 mM 醋酸銨 + 0.1% 甲酸 清洗溶劑 2（緩沖液 B，流速 1.25 mL/min） 20% 乙腈（水溶液）+ 10 mM 醋酸銨 + 0.1% 甲酸 采用流速為 1.25 mL/min 的洗脫溶劑（緩 沖液 C，75% 乙酸乙酯的甲醇溶液）將分析 物從安捷倫 A 型 (C4) 小柱上洗脫下來。在 連續(xù)五天內(nèi)以大約 15 秒/樣品的速度分析血 漿中的小分子藥物（2000 次進樣/天）。本 研究中使用的經(jīng)過優(yōu)化的 6470 三重

圖 2 顯示了 10000 次進樣開始和結(jié)束時阿pu唑侖 (A) 和氯dan平 (B) 的疊加 MRM 色譜 圖。圖 2 表明經(jīng)過 10000 次進樣后，阿pu唑侖和氯dan平的峰形和峰面積（峰高）仍保 持不變。 結(jié)論 Agilent 6470 三重四極桿質(zhì)譜儀采用創(chuàng)新性 離子遷移光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計，能夠大程度減少 樣品積聚的不良影響，為沉淀血漿樣品中目 標(biāo)候選藥物的超高通量分析提供了穩(wěn)定的分 析平臺。