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技術(shù)文章

液相色譜系統(tǒng)撲熱息痛及其雜質(zhì)的分析

閱讀:1223          發(fā)布時(shí)間:2022-1-7

摘要:儀器間方法轉(zhuǎn)換對(duì)多種行業(yè)的許多實(shí)驗(yàn)室來說都是充滿挑戰(zhàn)性的問題。難點(diǎn)在于不僅 要在考慮各儀器性能的同時(shí)維持保留時(shí)間不變,而且還要在儀器間方法轉(zhuǎn)換時(shí)不損失分 離度。安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET) 能夠?qū)崿F(xiàn)從延遲體積較高且混合行為不同的液 相色譜系統(tǒng)向 Agilent 1290 Infinity 和 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)的無縫方法 轉(zhuǎn)換。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹液相色譜方法從 Waters Alliance 2695 液相色譜系統(tǒng)向啟用/未啟用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)的輕松轉(zhuǎn)換,同時(shí)通過 Waters Empower 軟件進(jìn)行控制。采用上述兩種系統(tǒng)對(duì)撲熱息痛及其雜質(zhì)進(jìn)行分析,并分別將保留時(shí)間與 分離度進(jìn)行對(duì)比。

 

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前言 儀器間方法轉(zhuǎn)換對(duì)多數(shù)行業(yè)來說非常重要, 但通常也非常棘手。尤其在嚴(yán)格監(jiān)管的環(huán) 境下,分析物的保留時(shí)間和色譜分離度變化 使得經(jīng)過驗(yàn)證的已有方法轉(zhuǎn)換非常困難且費(fèi) 用高昂1 。偶爾,還需要將舊設(shè)備更換為新 設(shè)備。 安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET) 與 Agilent 1290 Infinity/Agilent 1290 Infinity II 液 相色譜系統(tǒng)相結(jié)合可模擬 Waters Alliance 2695 液相色譜系統(tǒng)等舊款非安捷倫儀器。 ISET 會(huì)考慮高延遲體積與不同梯度混合行為 的影響,并使安捷倫系統(tǒng)與老款非安捷倫系 統(tǒng)的保留時(shí)間一致。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)首先采用 Waters Alliance 2695 液相色譜系統(tǒng)對(duì)撲熱息痛及其雜質(zhì)進(jìn)行分 析,然后將方法轉(zhuǎn)換到配備有 Agilent 1290 Infinity II 泵的 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)中。通過啟用/禁用 ISET 來 評(píng)估 UHPLC 系統(tǒng)的方法轉(zhuǎn)換效果,并與 Waters Alliance 2965 液相色譜系統(tǒng)得到的 數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果表明,啟用 ISET 時(shí)保留時(shí)間相關(guān)性與分離度均非常出色。


實(shí)驗(yàn)部分 儀器 采用以下儀器對(duì)撲熱息痛及其雜質(zhì)進(jìn)行分析。 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng): • Agilent 1290 Infinity II 泵 (G7104A) • Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B) • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫 箱 (G7116B) • Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列 檢測(cè)器 (G7117B),配備 10 mm 最大 光強(qiáng)卡套式流通池 具有雙波長(zhǎng)吸收檢測(cè)器 VWD 2487 的 Waters Alliance 2695 溶劑和樣品 所有試劑均為液相色譜級(jí)。新制超純水產(chǎn)自 配置 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水純化系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)中采用以下各化合物的混合物: 主成分 撲熱息痛 (5 mg/mL) 雜質(zhì) A 2-乙酰氨基酚 (10 µg/mL) 雜質(zhì) B N-(4-羥苯基)丙酰胺 (10 µg/mL) 雜質(zhì) F 硝基苯酚 (10 µg/mL) 雜質(zhì) H 4-(乙酰氨基)乙酸苯酯(N,O-二乙酰-4-氨基 酚) (10 µg/mL) 雜質(zhì) J 對(duì)氯乙酰苯胺 (10 µg/mL) 雜質(zhì) K 4-氨基苯酚 (10 µg/mL) 色譜柱 Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 柱,4.6 × 100 mm, 3.5 µm(部件號(hào) 959961-902)

 

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軟件 • Waters Empower 3 (build 3471), 用于控制 Waters Alliance 2695 • Waters Empower 3 (build 3471) 采 用 Waters ICS 2.1 Hotfix 1 版和 Agilent ICF A.02.03 DU1 HF2 版共同 控制 Agilent 1290 Infinity II 液相色 譜系統(tǒng)

 

結(jié)果與討論 為展示能夠輕松實(shí)現(xiàn)從 Waters Alliance 2695 液相色譜系統(tǒng)到 1290 Infinity II 液相 色譜系統(tǒng)的無縫方法轉(zhuǎn)換,本研究對(duì)撲熱息 痛及其雜質(zhì)進(jìn)行了分析并對(duì)其保留時(shí)間和分 離度進(jìn)行了評(píng)估。 首先在 Waters Alliance 2695 液相色譜系 統(tǒng)中使用方法并將其轉(zhuǎn)換至未采用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)中。圖 1 顯示

上述兩系統(tǒng)分析得到的色譜圖。通過比較兩 幅色譜圖可以發(fā)現(xiàn),1290 Infinity II 液相色 譜系統(tǒng)因較低的系統(tǒng)延遲體積而使所有峰均 更早得到洗脫。 如需補(bǔ)償兩系統(tǒng)的延遲體積與梯度混合行為 的差異,僅需單擊泵方法選項(xiàng)卡啟用 ISET 功能。啟用 ISET 后,泵狀態(tài)面板中將出現(xiàn) 橙色圖標(biāo),如圖 2 所示。

 

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啟用 ISET 可明顯推遲 1290 Infinity II 液 相色譜系統(tǒng)的保留時(shí)間,使其與 Waters Alliance 2695 液相色譜系統(tǒng)結(jié)果具有更好 的一致性(圖 3,藍(lán)色跡線)。而采用具備 微調(diào)選項(xiàng)的 ISET 獲得的結(jié)果則與原色譜圖具有最佳則相關(guān)性(圖 3,黑色跡線)。用 戶可通過微調(diào)選項(xiàng)調(diào)節(jié)滯后體積從而進(jìn)一步 改善模擬效果2 。本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)在 ISET 參數(shù)界 面中額外增加了 100 µL 的延遲體積(圖 4)。

 

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使用設(shè)置不同的 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)得到的數(shù)據(jù)與 Waters Alliance 2695 液相 色譜系統(tǒng)采集的原始數(shù)據(jù)之間保留時(shí)間偏差 的詳細(xì)對(duì)比如圖 5 所示。ISET 的保留時(shí)間 偏差指標(biāo)范圍為 ±5%(RT > 6 min 時(shí)),或 ±0.3 min(RT ≤ 6 min 時(shí))2 。向未采用 ISET 的 UHPLC 系統(tǒng)進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換后得出的多數(shù) 色譜峰不符合上述指標(biāo)要求。而啟用 ISET 后,所有峰偏差均處于 ±0.3 min 或 ±5% 的指標(biāo)要求范圍內(nèi)。使用具備微調(diào)選項(xiàng)的 ISET 可對(duì) RT 偏差進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。優(yōu)化后 所有峰的偏差均小于 0.1 min 或 2%。

 

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結(jié)論 安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET) 可將現(xiàn)有 方法從傳統(tǒng) HPLC 系統(tǒng)無縫轉(zhuǎn)換至 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)等 UHPLC 系 統(tǒng)中。采用 ISET 后的 1290 Infinity II 液相 色譜系統(tǒng)能夠模擬原 HPLC 系統(tǒng)并獲得與原 數(shù)據(jù)集相近的保留時(shí)間。ISET 功能僅通過 單擊即可啟用,無需更改液相色譜系統(tǒng)硬件 或方法。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)將撲熱息痛及其雜質(zhì)分析方法從 Waters Alliance 2695 液相色譜系統(tǒng)轉(zhuǎn)換 至 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)中。 通過啟用具有微調(diào)選項(xiàng)的 ISET 使所有峰均 均獲得了良好的保留時(shí)間相關(guān)性,此外時(shí)還 提高了所有峰的分離度。



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