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摘要：Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)中的安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET) 能更加方便地 將分析方法從 Agilent 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)等傳統(tǒng) HPLC 系統(tǒng)中進(jìn)行轉(zhuǎn)移。本應(yīng) 用簡報(bào)舉例證實(shí)了 ISET 在分析六種三環(huán)抗抑郁藥方面的優(yōu)勢。在 1290 Infinity II 液相色 譜系統(tǒng)中，與未啟用 ISET 相比，啟用 ISET 時(shí)可以獲得 99% 的保留時(shí)間一致性。

前言：安捷倫智能系統(tǒng)模擬技術(shù) (ISET) 能夠模擬 不同液相色譜系統(tǒng)，從而實(shí)現(xiàn)分析方法在儀 器間的無縫轉(zhuǎn)移1,2。無需更改原始方法，僅 通過增加等度步驟等途徑就能得到相同的色 譜分析結(jié)果，從而使液相色譜分析方法的無 縫轉(zhuǎn)移成為可能。這使得用戶在運(yùn)行原先的 方法時(shí)無需對(duì)儀器或方法做任何改動(dòng)，也讓 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)成為真 正能夠運(yùn)行其他 HPLC 和 UHPLC 方法的通用 系統(tǒng)。而用戶也能夠選擇從 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)廣闊的能力范圍與性能 中受益。 三環(huán)抗抑郁藥是*用于治療抑郁癥的鎮(zhèn)靜 劑之一。此類藥物得名于其化學(xué)結(jié)構(gòu)中特征 性的三環(huán)。所有成分均有情緒增強(qiáng)的功效， 通常在服藥 2 - 4 周后明顯見效。三環(huán)抗抑 郁藥能夠抑制腦內(nèi)的神經(jīng)元對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)血清 素、去甲腎上腺素和多巴胺的再攝取。抑郁 癥患者的特點(diǎn)就是腦中上述神經(jīng)遞質(zhì)的濃度 均過低。三環(huán)抗抑郁藥對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)利用率的 提高有助于抵消神經(jīng)遞質(zhì)缺乏帶來的影響。 三環(huán)抗抑郁藥的分析在臨床化學(xué)與法醫(yī)毒理 學(xué)領(lǐng)域均非常重要。高效液相色譜 (HPLC) 是通常用于血清、血液或尿液樣品鑒定和定 量分析的穩(wěn)定而可靠的工具。 本應(yīng)用簡報(bào)介紹了六種三環(huán)抗抑郁藥混合物 的分離方法。分析結(jié)果證明，無需改動(dòng)原方 法即可將 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)中的 方法輕松轉(zhuǎn)移至 1290 Infinity II 液相色譜系 統(tǒng)中；還證明了啟用 ISET 功能即可使保留 時(shí)間保持不變。

實(shí)驗(yàn)部分 儀器 所有實(shí)驗(yàn)均在 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng) 和 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)中完成，兩 臺(tái)系統(tǒng)分別包括以下模塊。 Agilent 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)： • Agilent 1100 二元泵 (G1312A) • Agilent 1100 自動(dòng)進(jìn)樣器 (G1313A) • Agilent 1100 柱溫箱 (G1316A) • Agilent 1100 二極管陣列檢測器 (G1315B) Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)： • Agilent 1290 Infinity II 高速泵 (G7120A) • Agilent 1290 Infinity II Multisampler (G7167B) • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫 箱 (G7116B) • Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列檢 測器 (G7117B)

色譜柱 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4.6 × 75 mm, 3.5 µm（部件號(hào) 966967-902） 軟件 Agilent OpenLab CDS ChemStation，LC 和 LC/MS 系統(tǒng)版，修訂版 C.01.07 [采用 ISET 4 的 22] 樣品 六種三環(huán)抗抑郁藥混合物（按洗脫順序排 列）：普羅替林、曲米帕明、去甲替林、丙咪嗪。 化學(xué)品 所有試劑均為液相色譜級(jí)。甲醇購自德國 Merck 公司。新制超純水產(chǎn)自配置 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水純化系統(tǒng)。碳酸氫銨和 三環(huán)抗抑郁藥購自 Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, U.S)。

結(jié)果與討論 三環(huán)抗抑郁藥的分析選用傳統(tǒng)方法，方法具 體內(nèi)容已在 2002 年的安捷倫應(yīng)用簡報(bào)中進(jìn) 行了介紹3 。該方法采用 4.6 × 75 mm、裝填 3.5 µm 顆粒的傳統(tǒng) HPLC 色譜柱。將該方法 分別用于 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)、未采 用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)以及 采用了 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng) 中。通常將分析方法由傳統(tǒng)儀器向 UHPLC 系統(tǒng)進(jìn)行轉(zhuǎn)移時(shí)會(huì)出現(xiàn)問題，這些出現(xiàn)的 問題是由混合行為差異以及現(xiàn)代 UHPLC 系 統(tǒng)的延遲體積和過渡體積顯著降低造成的 （圖 1）。與 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)相 比，六種三環(huán)抗抑郁藥在 1290 Infinity II 液 相色譜系統(tǒng)中的保留時(shí)間更短。其他所有現(xiàn) 代 UHPLC 儀器在運(yùn)行傳統(tǒng)的液相色譜方法時(shí) 都會(huì)同樣出現(xiàn)類似現(xiàn)象。 一般用兩種途徑來解決這一問題： 1. 在梯度洗脫的起始階段增加等度洗脫步驟 2. 通過增加額外管線增大延遲體積 上述兩種方法均可補(bǔ)償較小的延遲體積，但 并不影響混合性能或過渡體積。在不進(jìn)行任 何補(bǔ)償?shù)那闆r下，全部六種分析物的保留時(shí) 間偏移范圍介于 6% - 9% 之間（表 2）。圖 2 顯示從 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)向啟用 ISET 與未啟用 ISET 的 1290 Infinity II 液相 色譜系統(tǒng)進(jìn)行的方法轉(zhuǎn)移。 啟用 ISET 后，保留時(shí)間與原色譜圖具有良 好的一致性。與未啟用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)相比，啟用后全部所分析化 合物的保留時(shí)間偏差均小于 1%（表 2 右側(cè) 列）。智能系統(tǒng)模擬技術(shù)中規(guī)定的允許偏差 為 5% 以下4 。

從保留時(shí)間和峰面積的精密度方面來看，采 用 ISET 的 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)明 顯優(yōu)于 1100 系列液相色譜系統(tǒng)（表 3）。

結(jié)論 模擬其他 HPLC 或 UHPLC 儀器時(shí)，Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)具備的 ISET 功 能使得用戶無需改動(dòng)儀器或方法即可運(yùn)行現(xiàn) 有 HPLC 或 UHPLC 方法，并能夠獲得高度一 致的色譜圖（保留時(shí)間一致性高于 99%）。 在 Agilent 1100 系列二元液相色譜系統(tǒng)與 啟用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity II 液相 色譜系統(tǒng)中分別采用傳統(tǒng)方法分析六種三環(huán) 抗抑郁藥所得到的結(jié)果證明了上述結(jié)論。此 外，保留時(shí)間和峰面積的精密度也得到了明 顯提升。