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技術(shù)文章

分析四環(huán)素類藥物的實(shí)驗(yàn)方法

閱讀:1772          發(fā)布時(shí)間:2019-10-25

樣品制備(蜂蜜)基于GB/T 18932.23-2003方法[1]

1.稱取6 g試樣(0.01 g)置于150mL三角瓶中,加入30mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液于液體混勻器上快速混合1min,使試樣*溶解。樣液倒入50mL離心管中,以3000r/min離心5min,待凈化。

2.將上清液移至下接Oasis HLB柱的貯液器中,以小于3mL/min通過Oasis固相萃取柱后,用5mL+水洗柱,棄去全部流出液。在65 kPa的負(fù)壓下抽干20min,后用15mL乙酸乙酯洗脫,收集洗脫液于100mL圓底燒瓶中。

3.按上述方法使洗脫液在減壓情況下以小于3mL/min的流速通過陰離子交換柱,待洗脫液全部流出后,用5mL甲醇洗柱,棄去全部流出液。在65 kPa負(fù)壓下抽干5min,再用4mL流動(dòng)相洗脫,收集洗脫液于5mL樣品管中,定容至4mL,供測(cè)定。

 

四環(huán)素類藥物

四環(huán)素類(TCs)為廣譜抗菌藥,主要有以下四種:

樣品制備(肉類)

稱取5.0 g肌肉組織均質(zhì)樣品,置于50mL離心管中,加入0.75%高氯酸溶液10mL,均質(zhì)30 s,振蕩提3min,以4000 r/min離心10min,取上清液于試管中,再重復(fù)提取一次,合并上清液于試管中。加正己1mL,振蕩1min,離心,除去正己烷層。水相過ODS-C18 柱(預(yù)先用5mL甲醇、2mL EDTA-Na2溶液和5mL去離子水洗過)凈化,用10mL蒸餾水洗雜質(zhì),氮?dú)獯蹈芍?,?/span>1mL4%甲酸的甲醇溶液以1mL/min洗脫,洗脫液用于測(cè)定。

 

注意事項(xiàng):

1、標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解配置儲(chǔ)備液,使用前用流動(dòng)相稀釋到濃度為1µg/mL左右。

2、因四環(huán)素和強(qiáng)力霉素為同分異構(gòu)體,[M+H]

+均為 m/z 445,需要分別優(yōu)化條件,而且優(yōu)化源參數(shù)

時(shí),也應(yīng)分別進(jìn)樣,確定各自的保留時(shí)間,并要求基線分離,另外2種不必基線分離。

3、梯度洗脫后進(jìn)下一針樣品時(shí)一定要充分平衡。

4、用空白提取液配制同樣濃度標(biāo)樣,按相同方法進(jìn)樣,觀察色譜峰形及保留時(shí)間是否合適,峰高有

 

色譜分離條件

Agilent 1100系統(tǒng):G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。

水相:5mmol/L 甲酸水溶液;有機(jī)相:乙腈。水相/有機(jī)相=2/8,等度洗脫?;蛄鲃?dòng)相:乙睛+甲醇

+0.4 %甲酸溶液(18+4+78)。流速:200µL/min

色譜柱:C18,3µm,150mm×2.0mm。

柱溫箱溫度:25℃;進(jìn)樣體積:20µL。

參考文獻(xiàn):

1Tetracycline Residues in Honey (HPLC-MSD Method) ACC-042-V1.1,Canada.

2Official Method of Analy sis of AOAC International 17th Edition (2000) Appendix D, Appendix E.

3 蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量的測(cè)定方法液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜GB/T18932.232003.

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