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AB液質(zhì)聯(lián)用儀分析孔雀石綠與相關(guān)的三苯甲烷類(lèi)染料的實(shí)驗(yàn)方法

閱讀:729          發(fā)布時(shí)間:2019-9-13

化學(xué)試劑 MG (孔雀石綠)     LMG (隱色孔雀石綠) C23H25N2    CAS: 2437-29-8    C23H26N2    CAS: 129-73-7     BG (亮綠)      CV (結(jié)晶紫) C27H33N2 CAS: 633-03-4    C25H30N3     CAS: 548-62-9   建議的內(nèi)標(biāo):D5-LMG。

 

AB液質(zhì)聯(lián)用儀色譜分離流動(dòng)相的制備: 1 M乙酸銨溶液:溶解77 g甲酸銨于1 L HPLC級(jí)的水中。 流動(dòng)相A:在1 L HPLC級(jí)的水中,加入1 mL甲酸,10 mL 1 M乙酸銨溶液。 流動(dòng)相B:在100 mL水中,加入1 mL甲酸,10 mL乙酸銨溶液,混勻后,用HPLC級(jí)的乙腈稀釋到1 L。

 

樣品制備(魚(yú)、水產(chǎn)品) 基于Bergwerff等人提出的方法[1]: 1.將2 mL pH=3.0的Mcllvaine溶液、100 mL 1 M的p-TSA、50 mL的N,N,N,,N,-四甲基-1,4-苯乙烯二胺的甲 醇溶液(1 mg/mL)進(jìn)行混合; 2.加入2 g勻漿的樣品于50 mL螺絲加蓋的聚丙烯管中; 3.渦旋混合; 4.加入12 mL乙腈; 5.振搖15 min; 6.15 ℃下,3400 r/min離心5 min; 7.加入pH=6.0的Mcllvaine溶液; 8.加入12 mL乙腈; 9.振搖15 min; 10.15 ℃下,3400 r/min離心5 min; 11.合并上清液;12.加入6 mL 二氯甲烷; 13.15 ℃下,3400 r/min離心5 min; 14.有機(jī)相進(jìn)行固相萃取。

 

基于Effkemann等人提出的方法[2]: 1.稱(chēng)量2 g勻漿過(guò)的魚(yú)肉組織; 2.加入100 µL內(nèi)標(biāo)溶液(D5-LMG,1 µg/mL); 3.加入900 µL水; 4.加入2 mL鹽酸羥胺溶液(5 g/L); 5.振搖并放置10 min; 6.加入8 mL乙腈; 7.振搖10 min; 8.4 ℃下,3000 r/min離心5 min; 9.將上清液吸入樣品,備用。 注意:新鮮的魚(yú)肉提取后,應(yīng)在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)完成分析,以防止孔雀石綠、隱色孔雀石綠的降解。

 

色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng):G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。 AB液質(zhì)聯(lián)用儀色譜柱:Phenomenex Synergi Max-RP反相柱,50 mm×2 mm,4 µm,80 Å。 流動(dòng)相:A相—水 + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸銨;B相—水 / 乙腈(10 / 90) + 0.1%甲酸 + 10 mM 乙酸銨。 梯度設(shè)置: 

 

 

 

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