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技術(shù)文章

安捷倫6550 iFunnel系統(tǒng)同時(shí)定性與定量分析丁螺環(huán)酮及其代謝物

閱讀:761          發(fā)布時(shí)間:2019-7-2

及時(shí)快速的對(duì)代謝穩(wěn)定性、代謝物鑒定及代謝物組成分析進(jìn)行評(píng)估,對(duì)于加快優(yōu)化先導(dǎo) 物和提高供試藥物開發(fā)的成功率是非常關(guān)鍵的。帶有多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 的三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀LC/MS 已經(jīng)成為定量分析的主力軍,如代謝穩(wěn)定性和代謝物組成分析研究。然而,該方 法主要用于已知目標(biāo)物的高靈敏度定量分析,但對(duì)于未知目標(biāo)物的定性分析不是非常適 用。鑒于此原因,通常在不同類型的質(zhì)譜上單獨(dú)進(jìn)行代謝物的鑒定分析(定性分析)。 由于傳統(tǒng)串聯(lián)質(zhì)譜靈敏度的限制,往往需要相對(duì)較高的底物濃度(即 10-20 µM)在較大 范圍內(nèi)進(jìn)行代謝物的鑒別。

在一臺(tái)儀器上通過一次運(yùn)行來完成定量與定性鑒別分析 (Qual/Quan),既能顯著提高代 謝穩(wěn)定性研究、代謝物鑒別及代謝物組成分析研究的效率,又能提高測(cè)定效率和降低藥 物研發(fā)的成本。本應(yīng)用報(bào)告介紹了定性/定量分析的整體工作流程,以丁螺環(huán)酮 (1µM) 在 大鼠肝微粒體中的體外代謝研究為例,驗(yàn)證了安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系統(tǒng) 在代謝穩(wěn)定性測(cè)定,代謝物鑒別和代謝物組成分析研究中的性能。

 

主要特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)

• 6550 iFunnel Q-TOF 能夠在不降低數(shù)據(jù) 質(zhì)量和分析速度的前提下,同時(shí)完成代 謝穩(wěn)定性、代謝物鑒別和代謝物組成分 析的定性與定量研究。

• 低至 pg/mL 的高靈敏度實(shí)現(xiàn)了在 60 min 內(nèi)對(duì)含有 1µM 丁螺環(huán)酮的大鼠肝微粒體 同時(shí)進(jìn)行丁螺環(huán)酮及其代謝物的定量和 鑒別。

• MS 和 MS/MS 的亞 ppm 質(zhì)量精度結(jié) 合出色的同位素保真度,能提供可靠的 代謝物鑒定和結(jié)構(gòu)解析結(jié)果。

• 利用高 50 張圖譜/秒的快速數(shù)據(jù)采集 速率可在 3.5 分鐘的運(yùn)行時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)準(zhǔn) 確定量分析。

• MassHunter 代謝物 ID 軟件在較寬范圍 進(jìn)行特征鑒定和 Novatia 自動(dòng)轉(zhuǎn)換算法, 極大促進(jìn)了代謝物的鑒別。

• MassHunter 定量分析軟件可提供快速 的批量數(shù)據(jù)采集和報(bào)告。

 

定性/定量一體化工作流程:定性/定量工作流程開始于生物樣品進(jìn)樣到 LC/MS 系統(tǒng)(如圖 1 所示)。使用安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系統(tǒng)時(shí),數(shù) 據(jù)采集包括 MS 全掃描及數(shù)據(jù)依賴的三個(gè) 自動(dòng) MS/MS 掃描。MassHunter 代謝物 ID 軟件有效的促進(jìn)了代謝物鑒別和結(jié)構(gòu)解 析。利用 MassHunter 定量分析軟件的批 量模式采集數(shù)據(jù)并建立數(shù)據(jù)集,通過該數(shù)據(jù) 集進(jìn)行代謝穩(wěn)定性和代謝物組成分析研究。

定性/定量分析 圖 2 顯示了丁螺環(huán)酮的代謝穩(wěn)定性和其代 謝物組成分析,并具體展示了 60 分鐘內(nèi) 丁螺環(huán)酮廣泛范圍的高豐度及低豐度代謝 產(chǎn)物。

圖 3 顯示了經(jīng)過 10 分鐘的處理后樣品中丁螺 環(huán)酮單羥基代謝物的 MS 和 MS/MS 譜圖。 母離子和碎片離子亞 ppm 的質(zhì)量精度以及出 色的同位素保真度(總匹配度 >99%),實(shí)現(xiàn)了可靠的代謝物鑒別和結(jié)構(gòu)解析。僅 3.5 分 鐘時(shí)間即獲得了良好的分離效果和廣泛的代 謝物分析(如圖 4 所示)。

 

結(jié)論:利用安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 和 兩種功能強(qiáng)大的工具軟件(MassHunter 代謝物 ID 和定量分析軟件)開發(fā)了一個(gè) 的定性/定量工作流程。安捷倫 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系統(tǒng)可對(duì) 1µM 經(jīng)處 理的丁螺環(huán)酮同時(shí)進(jìn)行定量和代謝物鑒定 分析,無論靈敏度還是通量或可信度均表 現(xiàn)。并且只需這一個(gè)分析平臺(tái)便能快 速開發(fā)出 LC/MS 通用方法,而且也不必再 浪費(fèi)時(shí)間為各個(gè)分析物進(jìn)行 MRM 優(yōu)化。

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