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技術文章

TSQ Altis三重四極桿對血漿中候選藥物混合物進行靈敏的定量分析

閱讀:820          發(fā)布時間:2019-5-21

目的:為檢測和定量人血漿中目標制劑混合物開發(fā)一種靈敏、耐用和可重現的 LC-MS/MS 分析 方法

前言:在大多數制藥企業(yè)中,小分子候選藥物作為新化學實體或仿制藥,占據了藥物發(fā)現管道 的大部分比例。目標定量分析是工作流程的一個關鍵組成部分,其要求成功開發(fā)出 小分子藥物。而這些目標定量分析必須在生物基質中完成,因此,常常帶來分析挑戰(zhàn)。 在本項研究中,我們報道了為大鼠血漿中多個藥物標準品開發(fā)的靈敏、耐用、可靠和可 重現的 LC-MS/MS 分析方法。

實驗:樣品制備 采用乙腈(ACN): 血漿 =3:1 破壞血漿,從而制備已破壞的血漿 儲備液。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘。去除上 清液,并加入等體積的水,終得到已破壞血漿的儲備原液。 將已破壞血漿儲備混合液中每種標準化合物濃度為 1 mg/mL 的 儲備液稀釋至
1 pg/mL–25,000 pg/mL 和 10 pg/mL-100,000 pg/mL。將同位 素標記的內標化合物加入到每個校正水平上,從而得到終濃 度為 0.5ng/mL 的內標溶液。所有試劑均購自 Cerilliant 公司(朗 德羅克,得克薩斯州),濃度為 1 mg/mL 的甲醇溶液。

液相色譜法:采用 Thermo ScientificTM VanquishTM Horizon HPLC 系統(tǒng) 進行色譜分離。所使用的色譜柱為 Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ C18 極性封端 LC 色譜柱(100 × 2.1  mm,1.9 µm 粒徑)。流動相 A 和 B 分別為 10 mM 甲 酸銨水溶液(采用 Fisher ChemicalTM  OptimaTM 級純水) 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱溫為 50 ℃。總運行時間為 3.5 分鐘(表 1)。

質譜分析法 采用 Thermo ScientificTM TSQ AltisTM 三重四極桿質譜儀進行質 譜分析,配置 Thermo ScientificTM  OptaMaxTM NG 離子源室。 表 2 和表 3 顯示了實驗設置中使用的質譜儀離子源和 SRM 參 數。

 

數據分析 采用 Thermo  ScientificTM  TraceFinderTM 軟件采集并處理數據。

 

結果與討論:研究發(fā)現,采用 TSQ Altis MS 測得的每個候選藥物的定量下限 (LLOQ)明顯低于采用以前幾代 MS 系統(tǒng)的測量值(表 4)。 此外,內標化合物的 %CV 值顯著降低也意味著 TSQ  Altis 質譜 的耐用性和重現性更優(yōu)。300 pg/mL QC 2 的典型色譜圖見圖 1。 QC 線性和重現性的更多詳細信息見表 5

 

 

 

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