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背景
PD-L1蛋白在腫瘤細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境（TME）中的高表達(dá)已被確定為預(yù)測免疫治療療效的生物標(biāo)志物，并被FDA批準(zhǔn)為各種實(shí)體瘤開始治療的指標(biāo)。然而，沒有證據(jù)表明循環(huán)PD-L1表達(dá)是否與組織PD-L1表達(dá)一致，以及循環(huán)PD-L1水平是否能預(yù)測組織PD-L1表達(dá)。由于分離過程復(fù)雜，臨床樣本中EV外泌體生物標(biāo)志物的鑒定和定量仍然具有挑戰(zhàn)性。通過流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)評估外泌體需要在檢測前分離外泌體，這在臨床環(huán)境中是不可行的。相比之下，Simoa®平臺可能提供一種超靈敏、無創(chuàng)、全自動(dòng)和高通量EV檢測，具有雙EV生物標(biāo)志物靶向特征。我們開發(fā)了基于Simoa®技術(shù)的PD-L1 + EV檢測測定法，并確定了T-EVs 與腫瘤組織之間PD-L1 表達(dá)的顯著相關(guān)性。
方法
含有EV的樣品與包被有捕獲Epcam抗體的磁珠一起孵育。將磁珠-EV復(fù)合物與生物素化的PD-L1檢測抗體和SBG依次孵育，然后加載到Simoa光盤上。SBG與 RGP的催化反應(yīng)在微孔中受到限制。如果將磁珠-EV-檢測抗體-SBG復(fù)合物加載到孔中，該儀器會(huì)檢測到熒光信號增加。
圖1. 用于檢測EV的Simoa免疫測定法的原型
結(jié)果
TPS臨界值比較了表達(dá)PD-L1的患者和不表達(dá)PD-L1的患者之間的Epcam-PD-L1 水平，當(dāng)TPS截止值設(shè)置為10%時(shí)，觀察到最高的AUC。在此臨界值下，陽性樣品中的Epcam-PD-L1 EV水平顯著升高。此外，Epcam-PD-L1 EV水平與每位患者的TPS 乘以腫瘤體積的相關(guān)性較高。
圖2. Epcam-PD-L1 EV信號在PD-L1高表達(dá)樣本中(TPS>10%）濃度較高(左圖)；Epcam-PD-L1 EV信號與TPS*Vol之間呈現(xiàn)較強(qiáng)相關(guān)性（右圖）
結(jié)論
根據(jù)我們的結(jié)果，Simoa®原型檢測特定來源的細(xì)胞外囊泡，可能提供一種無創(chuàng)和動(dòng)態(tài)的方法來監(jiān)測接受免疫治療的患者的腫瘤PD-L1表達(dá)。
