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構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株是生物制藥領(lǐng)域CMC流程中的核心步驟，通過精心策劃的實驗設(shè)計篩選出高效且穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)蛋白的細(xì)胞株，從而為后續(xù)的生物制品的產(chǎn)量和質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。
在構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株過程中，以下的關(guān)鍵環(huán)節(jié)需嚴(yán)格遵循以確保高效與穩(wěn)定：
1.載體策略與設(shè)計：在載體設(shè)計階段，需精心選擇啟動子、增強子等調(diào)控元件，以精確控制目的基因的表達(dá)水平。
2. 轉(zhuǎn)染方法與優(yōu)化：根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞類型及實驗需求，選擇合適的轉(zhuǎn)染方法，如電轉(zhuǎn)、脂質(zhì)體介導(dǎo)、病毒介導(dǎo)等。
3.高通量篩選與克隆鑒定：利用高通量篩選技術(shù)和先進(jìn)的檢測方法，如單細(xì)胞打印機，對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行快速篩選，挑選出表達(dá)水平高且穩(wěn)定的細(xì)胞克隆。
4.表達(dá)穩(wěn)定性監(jiān)測：在細(xì)胞株構(gòu)建完成后，需定期檢測目標(biāo)基因的表達(dá)情況，包括表達(dá)水平、時空分布等。通過長期跟蹤監(jiān)測，確保細(xì)胞株的遺傳穩(wěn)定性和表達(dá)穩(wěn)定性，以滿足后續(xù)實驗與應(yīng)用的需求。
單克隆篩選是細(xì)胞系開發(fā)中的關(guān)鍵步驟，旨在從混合細(xì)胞群體中分離出單個細(xì)胞，并使其增殖形成遺傳背景均一的細(xì)胞克隆。以下是一些常見的單克隆篩選方法：有限稀釋法，半固體培養(yǎng)基挑選法，以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等。
有限稀釋法和流式熒光激活細(xì)胞分選（FACS）很常見，但在效率、選擇控制和細(xì)胞活力等方面都不理想。有限稀釋法雖然經(jīng)濟，可能比FACS分選對細(xì)胞造成損傷小，但耗時耗力，可能還會有些人為因素的影響。
流式分選雖然對單細(xì)胞有良好控制且通量高，但分選時產(chǎn)生的高剪切力和持續(xù)靜電，會對敏感或部分受損細(xì)胞（如電轉(zhuǎn)）的存活率/克隆效率有很大不良影響。
單細(xì)胞打印技術(shù)它以一種非常溫和、低成本和高度可控技術(shù)，適合從0-40μm的各種特異性細(xì)胞克隆應(yīng)用。通過噴墨式打印技術(shù)將單個細(xì)胞非接觸式的分離到標(biāo)準(zhǔn)的96/384孔板中，實現(xiàn)高通量工作流程。特別適用于工程細(xì)胞的克隆，在維持細(xì)胞原有生命活力的同時，還為單細(xì)胞克隆性提供了直接的證據(jù)（提供每個打印細(xì)胞的可靠記錄），可根據(jù)細(xì)胞直徑、圓度和熒光強度進(jìn)行分選，并且可以整合到其它單細(xì)胞分析管路上，與各種下游流程的兼容性。
德國 Cytena 公司開發(fā)的單細(xì)胞分離篩選系統(tǒng) UP.SIGHT 2.0，通過自動化方式替代勞動密集和耗時的步驟來簡化細(xì)胞系開發(fā)的工作流程。將具有高效、快速和溫和的單細(xì)胞分選技術(shù)與超快速、高質(zhì)量的成像系統(tǒng)相結(jié)合，可實現(xiàn)噴嘴成像和3D全孔成像，從而通過獨立的光學(xué)設(shè)備雙重保證單克隆性
? >97% 單細(xì)胞分配效率
? >99.99% 單克隆概率
? 高達(dá) 80% 的克隆效率
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Nucleofector系統(tǒng)平臺是集Nucleofector技術(shù)與實驗創(chuàng)新于一體的高品質(zhì)研究工具。由電轉(zhuǎn)儀器和不同細(xì)胞的優(yōu)化電轉(zhuǎn)參數(shù)組成，可有效的將轉(zhuǎn)染底物直接轉(zhuǎn)入到細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，提供不同的平臺以滿足客戶不同的應(yīng)用需求。
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2，廣泛應(yīng)用于通過RNAi、CRISPR-Cas9、CRISPR-Cas12a進(jìn)行的基因敲除研究、以及iPS誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、CAR-T的研究中，在包括功能和結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、藥物發(fā)現(xiàn)以及基因和細(xì)胞療法的研究中大放異彩。
3，已成功轉(zhuǎn)染1200余種細(xì)胞系、130余種原代細(xì)胞，多數(shù)細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50-70%，部分原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率可超過90%。
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Ascend 是Revvity在第一代 Cellometer 細(xì)胞計數(shù)儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行了升級。全新設(shè)計的計數(shù)板，靈活可變的多樣本檢測，兩種模式自動聚焦、<30s速度快速檢測、超大面積圖像采集可覆蓋面積約為血球計數(shù)板的4-17倍等新性能，使細(xì)胞計數(shù)更準(zhǔn)確、可靠和高效.
一次檢測1-8個樣本，通量靈活
<30秒/樣本，僅需10或20ul細(xì)胞
細(xì)胞計數(shù)和活率分析，內(nèi)置400+細(xì)胞分析參數(shù)
