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轉(zhuǎn)染方法怎么選
你真的了解電轉(zhuǎn)嗎？
LONZA
▲轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。《分子克隆實驗指南》將轉(zhuǎn)染（Transfection）定義為：“將外源基因?qū)氩溉閯游锛?xì)胞的一系列技術(shù)的統(tǒng)稱"，實踐中細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA、RNA、蛋白等生物活性分子導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。
▲按照原理來分類
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方式可以分為3類:化學(xué)法、物理法和生物介導(dǎo)方法。電轉(zhuǎn)染作為具有代表性的物理方法轉(zhuǎn)染，出現(xiàn)于1982年，作為通用、易用的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，具有其他方法優(yōu)勢，如重復(fù)性好、適用范圍廣等特點，在一定條件下兼得電轉(zhuǎn)效率和細(xì)胞活率，尤其對目前對原代細(xì)胞和一般認(rèn)為難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞有較好的轉(zhuǎn)染效率。
▲各轉(zhuǎn)染方法優(yōu)缺點整理
01
Nucleofector™技術(shù)
▲Nucleofector™技術(shù)
隨著系統(tǒng)生物學(xué)與交義學(xué)科方法的應(yīng)用，要求細(xì)胞和系統(tǒng)模型越來越接近體內(nèi)細(xì)胞的功能。這就意味著將來的細(xì)胞轉(zhuǎn)染多數(shù)會是原代細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。而傳統(tǒng)的方法很難成功轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞。另外即使使用細(xì)胞系做為系統(tǒng)模型，傳統(tǒng)的方法也難重復(fù)出好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率與成活率。Nucleofector技術(shù)就從根本上解決這個問題，無論是原代細(xì)胞、干細(xì)胞、還是細(xì)胞系，它每次都可重復(fù)出很高的轉(zhuǎn)染效率。
▲原理
Nucleofection"技術(shù)是利用電擊在細(xì)胞膜上開個小孔，綜合各種特定細(xì)胞轉(zhuǎn)染程序與轉(zhuǎn)染液的作用，核酸底物不僅可以進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，還可直接通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核。這使得細(xì)胞最高轉(zhuǎn)染可達(dá)99%，而且實現(xiàn)轉(zhuǎn)染不依賴于細(xì)胞的分裂。
▲優(yōu)勢
與其他電轉(zhuǎn)方法相比，4D-Nucleofector™核轉(zhuǎn)系統(tǒng)，除了Lonza所研發(fā)的適用于不同實驗?zāi)康牡碾娹D(zhuǎn)儀設(shè)備之外，還配套不同細(xì)胞專屬的電轉(zhuǎn)試劑。該系統(tǒng)改進(jìn)了傳統(tǒng)金屬電極材質(zhì)的電極杯，通過高分子導(dǎo)電聚合物穩(wěn)定電脈沖發(fā)生的過程，避免金屬離子釋放對細(xì)胞帶來的毒性。操作簡單靈活、通量多元化、還有保護(hù)細(xì)胞功能貼壁轉(zhuǎn)染模塊（Y模塊）無需消化就可轉(zhuǎn)染，更好的保護(hù)細(xì)胞功能，特別適用于發(fā)育到后期的神經(jīng)元轉(zhuǎn)染。
02
4D-Nucleofector核轉(zhuǎn)染系統(tǒng)
▲Lonza 4D Nucleofector™平臺從實際需求出發(fā)，開發(fā)了從低通量到高通量，小體積到大體積的電轉(zhuǎn)染，研發(fā)到生產(chǎn)規(guī)模的設(shè)備型號，保證從小體系篩選到大規(guī)模電轉(zhuǎn)的可行性和放大工藝可轉(zhuǎn)移。包括如下功能模塊并匹配對應(yīng)應(yīng)用方向：
▲只需5步簡單的操作方案，實現(xiàn)輕松電轉(zhuǎn)?。。?/span>
▲4D-Nucleofector™ 核轉(zhuǎn)系統(tǒng)，除了電轉(zhuǎn)儀設(shè)備本身之外，還有不同細(xì)胞專屬的電轉(zhuǎn)試劑，可以支持在不同類型的細(xì)胞中都可以實現(xiàn)高效的，同時維持細(xì)胞功能的轉(zhuǎn)染結(jié)果。該系統(tǒng)改進(jìn)了傳統(tǒng)金屬電極材質(zhì)的電極杯，通過一種技術(shù)利用高分子導(dǎo)電聚合物穩(wěn)定電脈沖發(fā)生的過程，避免金屬離子釋放對細(xì)胞本身帶來的金屬離子毒性影響。在Lonza BioscienceKnowledge Center里面呈現(xiàn)了超過700種即用型protocol（包括細(xì)胞培養(yǎng)，傳代、電轉(zhuǎn)準(zhǔn)備、電轉(zhuǎn)方案、孵育方法以及優(yōu)化方案）及海量的資料和應(yīng)用FAQ（且一直在實際各地技術(shù)團(tuán)隊的協(xié)作下不斷更新）。
