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免疫熒光技術(shù)基本原理

閱讀:1238        發(fā)布時間:2021-2-23

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術(shù),是標記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。

Coons等于1941年*采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質(zhì)標記抗體而進行抗原定位的技術(shù)稱為熒光抗體技術(shù)(fluorescentantibodytechnique)。

 

用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結(jié)合,用于檢測或定位各種抗原,也可以與其他蛋白質(zhì)結(jié)合,用于檢測或定位抗體,但是在實際工作中熒光抗原技術(shù)很少應用,所以人們習慣稱為熒光抗體技術(shù),或稱為免疫熒光技術(shù)。以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學技術(shù)。

 

 

該技術(shù)的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未完*,結(jié)果判定的客觀性不足,技術(shù)程序也還比較復雜。

 

熒光免疫法按反應體系及定量方法不同,還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比,熒光免疫法無放射性污染,并且大多操作簡便,便于推廣。國外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,有相當一部分即屬于此類,并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產(chǎn)。

 

由于一般熒光測定中的本底較高等問題,熒光免疫技術(shù)用于定量測定有一定困難。近年來發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測定,與酶免疫測定和放射免疫分析一樣,在臨床檢驗中應用。

 

1.原理

 

免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性,所以當抗原抗體發(fā)生反應時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。

 

直接法:將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經(jīng)一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢。

 

間接法:如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異抗體(抗體)與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應,使之形成抗原—抗體—抗體復合物,再用水洗去未反應的標記抗體,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為抗體,其它步驟的抗原檢查相同。

 

標記的抗抗體是抗球蛋白抗體,同于血清球蛋白有種的特異性,如免疫抗雞血清球蛋白只對雞的球蛋白發(fā)生反應,因此,制備標記抗體適用于雞任何抗原的診斷。

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