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凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
閱讀：1719 發(fā)布時間：2019-5-21
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)及動力學(xué)研究，包括蛋白酶親和配基CHOM的制備，蛋白酶的親和層析分離純化，凝膠電泳鑒定及分子量測定，蛋白酶的動力學(xué)研究等。分離純化蛋白質(zhì)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和生物功能的基礎(chǔ)。根據(jù)蛋白質(zhì)的不同性質(zhì)，分離純化的方法也是不同的。
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
雖然更換緩沖液不能提高蛋白純度，但它卻在蛋白純化方案中起著極其重要的作用。不同的蛋白純化方法需要不同pH及不同離子強度的緩沖液。
假如你用硫酸銨將蛋白沉淀出來，毫無疑問蛋白是處在高鹽環(huán)境中，需要想辦法脫鹽，可用的方法有利用半透膜透析，通過勤換透析液體去除鹽分，此法尚可，但需幾個小時，通常要過夜，也難以用予大規(guī)模純化中。
新型的設(shè)備將透析膜夾在兩個板中間，板的一側(cè)加緩沖液，另一側(cè)加需脫鹽的蛋白溶液，并在蛋白溶液一側(cè)通過泵加壓，可以使兩側(cè)溶液在數(shù)小時內(nèi)達到平衡，若增加對蛋白溶液的壓力，還可迫使水分和鹽更多通過透析膜進入透析液達到對蛋白濃縮的目的。
也有出售的脫鹽柱，柱內(nèi)的填料是小孔徑的顆粒，蛋白分子不能進入孔內(nèi)，先于高濃度鹽離子從柱中流出，從而使二者分離。
蛋白純化的每一步都會造成目的蛋白的丟失，緩沖液平衡的步驟尤甚。蛋白會結(jié)合在任何它能接觸的表面上，剪切力、起泡沫和離子強度的快速變化很容易讓蛋白失活。