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應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

閱讀:910        發(fā)布時(shí)間:2024-9-25


在腫瘤治療領(lǐng)域,化療作為一種傳統(tǒng)和重要的治療手段,主要是通過(guò)化學(xué)藥物殺滅腫瘤細(xì)胞達(dá)到治療的目的。然而,由于其非特異性的殺傷作用引起的不良反應(yīng)一直是患者和醫(yī)療人員的難題。隨著基因靶點(diǎn)研究的不斷深入,腫瘤治療的靶向藥物應(yīng)運(yùn)而生,目標(biāo)明確的治療方式給患者帶來(lái)更好治療效果的同時(shí)也表現(xiàn)出更輕的藥物副反應(yīng),因此在臨床上獲得更廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景。替尼類藥物就是典型的靶向藥物代表之一,在非小細(xì)胞肺癌、淋巴癌、其他各種實(shí)體瘤的治療中作用顯著,臨床上對(duì)替尼類藥物血漿分析也對(duì)個(gè)性化用藥及精準(zhǔn)治療具有重要參考意義。


化合物信息

名稱

CAS 號(hào)

分子量

阿法替尼

850140-72-6

485.9

阿福替尼

1869057-83-9

568.6

阿萊替尼鹽酸鹽

1256589-74-8

519.1

阿美替尼

1899921-05-1

525.6

貝福替尼

1835667-63-4

567.6

伊馬替尼

152459-95-5

493.6

勞拉替尼

1454846-35-5

406.4

奧希替尼

1421373-65-0

499.6

吡咯替尼

1269662-73-8

583.1


實(shí)驗(yàn)室研究發(fā)現(xiàn),對(duì)血漿基質(zhì)來(lái)說(shuō),部分初代替尼化合物如伊馬替尼,可以通過(guò)蛋白沉淀的方法直接進(jìn)行分析。但對(duì)于三代替尼類藥物蛋白沉淀方法的回收率較低,很可能無(wú)法滿足分析需求,因此我們開(kāi)發(fā)了基于 SPE 的前處理方法進(jìn)行分析,具體方案如下。


應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

前處理


預(yù)處理:

200 µL 血漿加入 200 µL 5% 甲酸水溶液,渦旋,待凈化;


活化:

96 孔板依次使用 200 µL 甲醇、200 µL 水活化;


上樣:

加載預(yù)處理后的血漿至活化后微孔板;


淋洗:

650 µL 水溶液淋洗微孔板;


洗脫:

用 100 µL 2% 氨水甲醇溶液洗脫 2 次,渦旋混合;


氮干復(fù)溶:

40 ℃ 氮?dú)飧稍锖?,加?200 µL 初始比例流動(dòng)相渦旋混合,待檢測(cè)。


應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

分析

色譜條件

色譜柱:Kinetex C18 (2.1×50 mm, 1.7 μm, 100 ?); P/N: 應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案00B-4475-AN

流動(dòng)相 A 相:5mM 甲酸銨 - 0.1% 甲酸水溶液

流動(dòng)相 B 相:0.1% 甲酸甲醇溶液

流速:0.5 mL/min

柱溫:40 ℃

進(jìn)樣量:5 μL

梯度程序見(jiàn)下表:

時(shí)間 (min)

流速 (mL/min)

B (%)

0

0.5

20

0.5

0.5

40

2.8

0.5

70

3.0

0.5

100

4.0

0.5

100

4.5

0.5

20

6.0

0.5

20


質(zhì)譜條件

離子源類型:電噴霧離子源(ESI+)

掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)正負(fù)離子模式(MRM)

噴霧針電壓:5500 V

離子源溫度:500 ℃

加熱器(GS1):60 psi

輔助加熱氣(GS2):60 psi

氣簾氣(CUR):40 psi

碰撞氣(CAD):10 psi


應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

結(jié)果(藥物譜圖未呈現(xiàn)完)

加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果

名稱

加標(biāo)濃度 ppb

相對(duì)回收

%

RSD

(N=6)

基質(zhì)效應(yīng)

%

阿法替尼

10

82.3

3.7

+38.3

阿福替尼

6.25

56.5

3.9

+2.76

阿萊替尼鹽酸鹽

5

81.5

3.5

+19.1

阿美替尼

12.5

72.7

4.6

-7.1

貝福替尼

25

63.5

3.1

+7.5

伊馬替尼

10

82.3

3.4

-0.7

勞拉替尼

10

87.9

4.6

+40.1

奧希替尼

10

72.3

8.4

-2.7

吡咯替尼

5

87.0

8.2

+8.6


應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

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空白血漿總 XIC 色譜圖

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

替尼 L1 加標(biāo)回收色譜圖

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

阿萊替尼線性圖

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

阿法替尼線性圖

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

伊馬替尼線性圖

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

勞拉替尼線性圖


應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案

產(chǎn)品

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

PCX 96-Wellplate

5mg/1mL/well,

2/Pk

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案CX00501-MW

Kinetex C18

2.1×50 mm,

1.7 μm, 100 ?

應(yīng)用案例 | 替尼類藥物的血漿分析方案00B-4475-AN




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