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詳細解析超快速液相色譜儀的三大系統(tǒng)

閱讀:1012      發(fā)布時間:2022-4-20
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  超快速液相色譜儀通常都被認為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動相的多少來決定制備液相色譜,而是依據(jù)分離目的來決定。分析液相的目的是給一種組份進行定量和定性。制備液相的目的是對產(chǎn)品的單體進行提取和純化。與傳統(tǒng)的純化方法(如蒸餾、萃取)比較,制備液相是一種更有效的分離方法,因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加,超快速液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴大發(fā)展。
 

 

  產(chǎn)品采用先進技術(shù),提供一個快速、效率的大規(guī)模分離系統(tǒng),由并聯(lián)泵和具有先進電子線路、1200條/mm凹面光柵光路系統(tǒng)的紫外-可見檢測器、全反控的工作站等組成。主要用于小型實驗室,天然產(chǎn)物分離、蛋白質(zhì)純化與鑒定、有機合成產(chǎn)物分離純化、精細化學(xué)品剖析、新藥化合物篩、HPLC樣品前處理。
 
  超快速液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),下面將分別敘述其各自的組成與特點。
  1、進樣系統(tǒng):
  超快速液相色譜儀一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作,進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。
  2、輸液系統(tǒng):
  該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47~4.4X10Pa,流速可調(diào)且穩(wěn)定,當高壓流動相通過層析柱時,可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng),可加快其在柱中的移動速度,這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存器和梯度儀,可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值,或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)都能獲得有效分離。
  3、分離系統(tǒng):
  該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長度為10~50cm,內(nèi)徑為2~5mm,由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,住內(nèi)裝有直徑為5~10μm粒度的固定相。固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,它們都有惰性、多孔性(孔徑可達1000)和比表面積大的特點,加之其表面經(jīng)過機械涂漬,或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因或配體的有機化合物。因此,這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如,在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來。另外,固定相基質(zhì)粒小,柱床極易達到均勻、致密狀態(tài),極易降低渦流擴散效應(yīng)?;|(zhì)粒度小,微孔淺,樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據(jù)柱效理論分析,基質(zhì)粒度小,塔板理論數(shù)N就越大。這也進一步證明基質(zhì)粒度小,會提高分辨率的道理。再者,高效液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,通過改善傳質(zhì)速度,縮短分析時間,就可增加層析柱的效率。

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