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中級(jí)會(huì)員 | 第4年

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倒置熒光顯微鏡進(jìn)行顯微觀察時(shí)的相關(guān)講述

時(shí)間:2023/2/15閱讀:1485
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倒置熒光顯微鏡特點(diǎn)是激發(fā)光從物鏡向下落射到標(biāo)本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個(gè)雙色束分離器,它與光鈾呈45°角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時(shí)進(jìn)入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開,殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數(shù)愈大熒光愈強(qiáng)。
倒置顯微鏡具有在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行顯微觀察的特點(diǎn);可以觀察不經(jīng)染色的透明活體;落射熒光顯微適用于熒光顯微術(shù)。該儀器適用于對活體細(xì)胞和組織、流質(zhì)、沉淀物等進(jìn)行顯微研究,是生物學(xué),細(xì)胞學(xué),腫瘤學(xué),遺傳學(xué),免疫學(xué)等研究工作的理想儀器??晒┛蒲?、高校、醫(yī)療、防疫和農(nóng)牧等部門使用。倒置熒光顯微鏡是由倒置顯微鏡和落射熒光顯微鏡組成。儀器配有長工作距離平場消色差物鏡、大視野目鏡、雙目觀察,倒置顯微鏡還配有*長或*長工作距離聚光鏡,同時(shí)配有相襯裝置及長工作距離平場相襯物鏡。
倒置熒光顯微鏡的功能之三是熒光觀察,其基本原理是利用激發(fā)光激發(fā)樣本產(chǎn)生熒光,從而實(shí)現(xiàn)樣本的形狀與定位觀察,主要適用于熒光標(biāo)記樣本的觀察。熒光觀察是倒置熒光顯微鏡的重要功能,其配件貴且使用特殊。要想醫(yī)學(xué)研究生正確地掌握熒光觀察的操作使用規(guī)范,教師除了教會(huì)他們掌握基本的操作方法,同時(shí)更為重要的是教會(huì)他們掌握它的特殊性。在標(biāo)本制作中,載玻片和蓋玻片應(yīng)表面光潔且厚度適宜(載玻片在0.8mm~1.2mm之間,蓋玻片在0.17mm左右);標(biāo)本應(yīng)厚度適宜,同時(shí)避免細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蓋;封裱劑應(yīng)使用甘油和碳酸鹽緩沖液(0.5mol/L PH9.0~9.5)的等量混合液。其次,在熒光觀察前,應(yīng)關(guān)閉房間內(nèi)的電燈和倒置熒光顯微鏡的白光,確保處于暗室環(huán)境。*后,在熒光觀察中,應(yīng)嚴(yán)格控制觀察時(shí)間,一般以1~2小時(shí)/次為宜,否則熒光會(huì)出現(xiàn)衰減和消失的現(xiàn)象;調(diào)整光源時(shí)應(yīng)佩戴防護(hù)眼鏡,避免紫外線對眼鏡的傷害。

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