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了解高效液相色譜的裝置

閱讀:1870        發(fā)布時(shí)間:2020-10-16

高效液相色譜的裝置主要有:輸液泵,色譜柱,進(jìn)樣器,檢測器,餾分收集器,數(shù)據(jù)獲取和處理系統(tǒng)等。


(一)輸液泵:泵是一套高效液相色譜設(shè)備中重要的單元部件,是驅(qū)動(dòng)溶劑和樣品通過色譜分離柱和檢測系統(tǒng)的高壓源,其性能好壞直接影響整個(gè)儀器和分析結(jié)果的可靠性。用于分析目的的泵應(yīng)當(dāng)流量穩(wěn)定、耐高壓(30—60MPa)、耐各種流動(dòng)相,如有機(jī)溶劑、水和緩沖液。目前,商品高效液相色譜儀普遍采用體積小、方便多用的往復(fù)泵和隔膜泵。

 

(二)色譜柱:色譜柱是色譜儀的心臟,色譜的核心問題分離是在色譜儀中進(jìn)行的。為適應(yīng)不同的分離分析要求,色譜柱有不同的柱型,內(nèi)裝不同性質(zhì)的填料。常使用的色譜柱是10~30cm長,2~5mm內(nèi)徑的內(nèi)壁拋光的不銹鋼管柱,內(nèi)裝5~10μm高效微粒固定相,采用高壓勻漿裝柱技術(shù)填充。相同柱長的效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氣相色譜,例如2mm細(xì)內(nèi)徑柱、250cm長的5μm YWG硅膠柱柱效可達(dá)20000理論塔板數(shù),而5μm YQG—CH反相鍵合相柱效可達(dá)14000理論塔板數(shù)。高效色譜柱的填充需要特殊的設(shè)備和技術(shù),各色譜儀和色譜產(chǎn)品廠家均提供預(yù)裝柱。

 

(三)進(jìn)樣器:待分析樣品從柱頭進(jìn)樣器引入的方式可分為注射器進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣四種,其中注射器進(jìn)樣和閥進(jìn)樣常用。在10MPa以下的進(jìn)口壓力可用1~10μL的微量注射器進(jìn)樣,一般能獲得高的柱效率,但進(jìn)樣重復(fù)性不佳,特別是在較高壓力下。閥進(jìn)樣時(shí)進(jìn)樣體積可變也可以固定,但柱效會(huì)受些影響。自動(dòng)進(jìn)樣器適合于多樣品重復(fù)操作,便于用微處理機(jī)控制,實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。

 

 

(四)檢測器:被分析組分在柱流出液中濃度的變化可通過檢測器轉(zhuǎn)化為光學(xué)的或電學(xué)的信號(hào)而被檢出,從而完成定性定量任務(wù)。HPLC常用的檢測器包括示差折光檢測器(RI)、紫外檢測器(UV)、熒光檢測器和電化學(xué)檢測器。色譜柱的恒溫控制不必每臺(tái)必配,許多場合下色譜柱和檢測器在環(huán)境溫度下使用即能滿足要求。為了增加柱效、改善分離或者是為了取得更準(zhǔn)確的熱力學(xué)數(shù)據(jù),有時(shí)在較高溫度下恒溫操作。紫外檢測器經(jīng)恒溫控制后有利于增加穩(wěn)定性。

 

(五)餾分收集器:如果所進(jìn)行的色譜分離不是為了純粹的色譜分析,而是為了做其他波譜鑒定,或獲取少量試驗(yàn)樣品,就需要進(jìn)行餾分收集。用小試管收集,手工操作只適合于少數(shù)幾個(gè)餾分,手續(xù)繁瑣,易出差錯(cuò)。使用餾分收集器進(jìn)行餾分收集,便于用微處理機(jī)控制,按預(yù)先規(guī)定好的程序,或按時(shí)間,或按色譜峰的起落信號(hào)逐一收集和重復(fù)多次收集。

 

(六)數(shù)據(jù)獲取和處理系統(tǒng):把檢測器的信號(hào)顯示出來的數(shù)據(jù)系統(tǒng)有多種形式。電位差式長圖記錄器,記錄信號(hào)隨時(shí)問變化,得到色譜流出曲線或色譜圖。采用積分儀可以進(jìn)行定性定量,記錄保留時(shí)間和峰面積。*的反相液相色譜儀多用微處理機(jī)控制,微計(jì)算機(jī)一是作為數(shù)據(jù)處理機(jī),輸入定量校正因子,按預(yù)先選定的定量方法(歸一化、內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法等),將面積積分?jǐn)?shù)換算成實(shí)際的成分分析結(jié)果,或者給出某些色譜參數(shù);二是作為控制機(jī),控制整個(gè)儀器的運(yùn)轉(zhuǎn),按預(yù)先編好的程序控制沖洗劑的選擇、梯度淋洗、流速、柱溫、檢測波長、進(jìn)樣和數(shù)據(jù)處理。所有指令和數(shù)據(jù)通過鍵盤輸入,結(jié)果在陰極射線管或繪圖打印機(jī)上顯示出來。更新一代的色譜儀,應(yīng)當(dāng)具有某些人工智能的特點(diǎn),即能根據(jù)已有的規(guī)律自動(dòng)選擇操作條件,根據(jù)規(guī)律和已知的數(shù)據(jù)、信息進(jìn)行判斷,給出定性定量結(jié)果。

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