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凝膠滲透色譜的操作流程注意細(xì)節(jié)

閱讀:935      發(fā)布時(shí)間:2025-2-10
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  凝膠滲透色譜是一種基于分子尺寸對(duì)聚合物進(jìn)行分離和分析的技術(shù),其使用流程主要包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟:
  1. 前期準(zhǔn)備
  - 樣品溶解:選取合適的溶劑將樣品充分溶解。溶劑不僅要能溶解多種聚合物,還不能腐蝕儀器部件,并且要與檢測(cè)器相匹配。對(duì)于一些難溶的樣品,可以采用加熱、攪拌或超聲等方法輔助溶解。
  - 樣品過(guò)濾:溶解后的樣品溶液需要用特定孔徑的濾膜進(jìn)行過(guò)濾,以去除其中的雜質(zhì)和不溶物,防止它們堵塞色譜柱或影響檢測(cè)結(jié)果。一般使用0.2μm或0.45μm的濾膜。
  - 儀器預(yù)熱:打開(kāi)凝膠滲透色譜儀的電源,啟動(dòng)泵系統(tǒng),讓流動(dòng)相在系統(tǒng)中循環(huán)一段時(shí)間,使儀器達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。同時(shí),檢查儀器的各個(gè)部件是否正常工作,如檢測(cè)器、進(jìn)樣器等。
  2. 參數(shù)設(shè)置
  - 流動(dòng)相選擇與流速設(shè)定:根據(jù)樣品的性質(zhì)和色譜柱的要求,選擇合適的流動(dòng)相。常見(jiàn)的流動(dòng)相有四氫呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑。然后,設(shè)置合適的流動(dòng)相流速,一般在0.5-1.5ml/min之間。流速過(guò)快可能會(huì)影響分離效果,流速過(guò)慢則會(huì)延長(zhǎng)分析時(shí)間。
  - 柱溫設(shè)定:不同的樣品和色譜柱可能需要不同的柱溫。一般來(lái)說(shuō),溫度越高,分子的運(yùn)動(dòng)越快,分離速度也會(huì)越快,但同時(shí)也會(huì)影響分子與固定相之間的相互作用。因此,需要根據(jù)具體情況選擇合適的柱溫,通常在20-60℃之間。
  - 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)置:根據(jù)所使用的檢測(cè)器類型,設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)。例如,對(duì)于示差折光檢測(cè)器,需要設(shè)置靈敏度、衰減等參數(shù);對(duì)于紫外檢測(cè)器,需要設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)等參數(shù)。
  3. 樣品進(jìn)樣
  - 手動(dòng)進(jìn)樣:如果儀器配備手動(dòng)進(jìn)樣器,先將進(jìn)樣器的注射器吸取一定量的樣品溶液,一般為50-100μl,然后將注射器的針頭插入進(jìn)樣口,緩慢注入樣品溶液,注意要避免產(chǎn)生氣泡和漏液。
  - 自動(dòng)進(jìn)樣:如果儀器配備自動(dòng)進(jìn)樣器,按照操作界面的提示,設(shè)置進(jìn)樣的體積、速度等參數(shù),然后將樣品溶液放入自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品盤中,儀器會(huì)自動(dòng)完成進(jìn)樣操作。
  4. 數(shù)據(jù)采集與分析
  - 基線穩(wěn)定:在樣品進(jìn)入色譜柱之前,需要等待基線穩(wěn)定?;€是檢測(cè)器在沒(méi)有樣品通過(guò)時(shí)的響應(yīng)信號(hào),只有當(dāng)基線平穩(wěn)后,才能開(kāi)始采集數(shù)據(jù),以確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
  - 數(shù)據(jù)采集:當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后,檢測(cè)器會(huì)實(shí)時(shí)檢測(cè)到樣品中各組分的濃度變化,并將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào)傳輸給數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)會(huì)記錄下每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度,形成色譜圖。
  - 數(shù)據(jù)分析:根據(jù)色譜圖,可以得到樣品中各組分的保留時(shí)間、峰面積、峰高等信息。利用這些信息,可以計(jì)算出樣品的分子量分布、平均分子量等參數(shù)。同時(shí),還可以通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖進(jìn)行對(duì)比,對(duì)樣品中的未知組分進(jìn)行定性分析。
  5. 儀器清洗與維護(hù)
  - 清洗色譜柱:分析結(jié)束后,需要用合適的溶劑對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗,以去除殘留的樣品和雜質(zhì)。清洗的時(shí)間和流速可以根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整,一般為30分鐘至數(shù)小時(shí)不等。
  - 關(guān)機(jī):清洗完成后,關(guān)閉泵系統(tǒng)和檢測(cè)器的電源,然后按照儀器的操作規(guī)程關(guān)閉儀器的總電源。最后,對(duì)儀器進(jìn)行清潔和維護(hù),為下一次使用做好準(zhǔn)備。

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