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(DHA)對大鼠骨關(guān)節(jié)炎動物模型(OA)關(guān)節(jié)軟骨組織退變的影響

時間:2023/7/25閱讀:701
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  摘要
  骨關(guān)節(jié)炎模型,動物模型,構(gòu)建動物模型實(shí)驗(yàn),動物造模,大鼠模型,模型大鼠
  骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis, OA)是一種關(guān)節(jié)慢性退行性疾病,主要臨床癥狀為關(guān)節(jié)疼痛、僵硬、畸形和功能障礙。
  OA通常發(fā)生于老年人,研究表明超過一半的65歲以上老年人都有癥狀性或影像學(xué)上的OAP。OA會導(dǎo)致患者肢體殘疾和生活質(zhì)量嚴(yán)重下降,其主要治療方式包括減少關(guān)節(jié)負(fù)重、藥物治療、物理治療和手術(shù)治療。
  二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)是一種n-3多不飽和脂肪酸,與二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)相同,不飽和雙鍵起始于甲基端的第3個碳原子上。DHA和EPA的天然來源主要是海洋動物,如貝類、甲殼類、魚類,特別是鰭、鮭、鯡、沙丁魚等,是飲食中重要的營養(yǎng)物質(zhì)。
  研究發(fā)現(xiàn),DHA對多個系統(tǒng)具有廣泛而明確的抗炎作用,并應(yīng)用于包括心血管疾病、炎癥性腸病、肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪肝等多種炎癥性疾病的實(shí)驗(yàn)動物模型和臨床試驗(yàn)中。但目前DHA對OA炎癥反應(yīng)的抑制活性及其對關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)能力尚不清楚。
  本研究在體外實(shí)驗(yàn)中,利用大鼠OA模型測定DHA對OA關(guān)節(jié)軟骨的影響,并測定細(xì)胞凋亡、自噬及炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá),以了解DHA對OA關(guān)節(jié)軟骨的影響及機(jī)制。
  目的
  研究二十二碳六烯酸(DHA)對大鼠骨關(guān)節(jié)炎(OA)關(guān)節(jié)軟骨組織退變的影響,并初步探討其機(jī)制。
  方法
  手術(shù)切除內(nèi)側(cè)半月板、切斷前交叉韌帶構(gòu)建大鼠OA動物模型,并采用富含DHA的飼料喂養(yǎng);同時采用假手術(shù)或正常飼料喂養(yǎng)進(jìn)行對照。HE染色、甲苯胺藍(lán)染色、番紅O-固綠染色觀察關(guān)節(jié)軟骨組織退變程度,采用改良Mankin評分評價番紅O-固綠染色標(biāo)本關(guān)節(jié)軟骨組織損傷;采用免疫組織化學(xué)染色法檢測關(guān)節(jié)軟骨組織中Ⅱ型膠原的表達(dá);采用蛋白印跡法檢測關(guān)節(jié)軟骨組織中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)、Beclin-1及通路蛋白磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化p38蛋白(p-p38)的表達(dá);microCT觀察軟骨下骨的結(jié)構(gòu)變化。
  結(jié)果
  口服DHA減輕OA大鼠關(guān)節(jié)軟骨退變程度,并顯著降低Mankin評分;免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示DHA可提高軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原陽性表達(dá)率;蛋白印跡法檢測結(jié)果顯示DHA可減少關(guān)節(jié)軟骨組織中mTOR和MMP-13的表達(dá),并增加Beclin-1的表達(dá);microCT顯示DHA可改善骨小梁微細(xì)結(jié)構(gòu),減少軟骨下骨囊變及硬化;通路蛋白檢測顯示DHA可顯著抑制p-p38的表達(dá)。

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  結(jié)論
  DHA可有效減輕OA大鼠關(guān)節(jié)軟骨退變及損傷,并改善軟骨下骨微細(xì)結(jié)構(gòu)。這一作用通過增加軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和Beclin-1的表達(dá),并降低mTOR和MMP-13的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)。DHA的作用機(jī)制為抑制p38通路。

 

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