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分析粗多糖含量測定中選擇葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的原因
多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通過糖苷鍵連接在一起的聚合物(一般10個以上)。多糖是一切有生命的有機體*的成分，它與維持生命的種種生理機能有著密切的。用于粗多糖含量測定的方法有很多，一類是利用了多糖的還原性，測定還原性多糖的方法有3, 5-二硝基水楊酸鹽(DNS)比色法和Somogyi-Nelson法。另一類測定方法，也是現(xiàn)在普遍使用的方法，是利用多糖在強酸性條件下脫水生成糠醛或其衍生物，然后再與酚類或胺類化合物縮合，生成有特殊顏色的物質(zhì)的這一性質(zhì)進行測定，這類方法有地衣酚-硫酸法、苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。
苯酚-硫酸法是用得較多的方法，苯酚-硫酸試劑可與游離的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起顯色反應(yīng)，己糖在490 nm處有zui大吸收值，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。此法是先用標(biāo)準(zhǔn)糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線后，再通過多糖的顯色反應(yīng)測定吸光度，然后根據(jù)其在曲線上的位置推算出多糖的濃度從而推算其含量。此法操作簡單、快速、靈敏、重復(fù)性好，對每種糖僅需制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。蒽酮-硫酸法是另一種常用的方法，其原理是利用糖類遇濃硫酸脫水后生成糖醛或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合，反應(yīng)后溶液呈藍綠色，于620 nm處有zui大吸收，顯色深度與多糖的含量呈線性關(guān)系。
目前，在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品的選用上普遍存在爭議。葡萄糖因為其低廉的價格和方便的來源，一直是研究人員的。但當(dāng)我們深究比色法的原理，發(fā)現(xiàn)其本身不能區(qū)分單糖和寡糖，所以它的測定結(jié)果很大程度上依賴于標(biāo)準(zhǔn)品的選擇。此外，比色法通常用濃硫酸短時間水解粗多糖，對于分子量較小的粗多糖，高濃度的硫酸可以在較短時間內(nèi)將其水解成寡糖和單糖，但當(dāng)粗多糖的分子量較大時，水解是很難控制的。比如對香菇粗多糖（分子量500,000——1,000,000）的*水解就需要4M HCl或2M H2SO4于100℃作用3-6小時。因此如果用葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線，勢必對粗多糖樣品中大分子部分的測量帶來很大的誤差。對于比色法測定當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品與被測樣品的結(jié)構(gòu)類似時，得到的結(jié)果要準(zhǔn)確得多，用葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)品和用葡聚糖做標(biāo)準(zhǔn)品測粗多糖含量時，前者測的結(jié)果不同程度的偏高。這樣看來，用葡萄糖作為測定多糖含量的標(biāo)準(zhǔn)品是不合適的。
認識到這一事實，人們開始逐漸改用葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品作為測定粗多糖含量的標(biāo)準(zhǔn)品，使用的是分子量為500,000的葡聚糖。