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我國學(xué)者在細胞代謝檢測與成像技術(shù)方面取得重要進展

閱讀:1058          發(fā)布時間:2018-7-19

我國學(xué)者在細胞代謝檢測與成像技術(shù)方面取得重要進展在國家自然科學(xué)基金重大研究計劃、國家杰出青年科學(xué)基金項目和面上項目的資助下,華東理工大學(xué)楊弋教授團隊開發(fā)了一系列特異性檢測還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的高性能遺傳編碼熒光探針iNap。相關(guān)研究成果以“Genetically encoded fluorescent sensors reveal dynamic regulation of NADPH metabolism”(遺傳編碼的熒光探針揭示NADPH代謝的動態(tài)調(diào)節(jié))為題于2017年6月5日以“研究長文”的形式在線發(fā)表在Nature Methods,2017年7月28日正式刊出。
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH/NAD+)及其磷酸化形式(NADPH/NADP+),作為生物體內(nèi)兩對重要的輔酶和核心代謝物,常被用作評價細胞代謝狀態(tài)的關(guān)鍵指標(biāo),與衰老及相關(guān)疾病如癌癥、糖尿病、肥胖癥、心腦血管疾病、神經(jīng)性退行性疾病等的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。長久以來,細胞代謝的檢測主要依賴酶學(xué)、色譜、質(zhì)譜等,這些方法不僅破壞了細胞或生物體的完整性,更難以應(yīng)用于高通量篩選。
 
為了解決這一重要科學(xué)難題,2011年,楊弋教授團隊利用合成生物學(xué)方法開發(fā)了一系列遺傳編碼的NADH熒光探針,實現(xiàn)了在活細胞及各種亞細胞結(jié)構(gòu)中對NADH分子的實時動態(tài)、特異性的檢測與成像(Cell Metabolism, 2011, 14, 555)。2015年,該團隊又報道了可同時檢測NAD+,NADH及其比率的第二代細胞代謝熒光探針NADH氧化還原比率探針(SoNar),像火眼金睛一樣,可察覺到癌細胞與正常細胞的微細代謝差異(Cell Metabolism, 2015, 21, 777)。并進一步建立了細胞代謝熒光探針在單細胞、活體動物成像及高通量藥物篩選方面的系統(tǒng)研究方法(Nature Protocols, 2016, 11, 1345)。
 
NADH和NADPH的熒光光譜相似,但是二者的生理功能卻顯著不同。NADH主要參與物質(zhì)能量代謝,而NADPH主要參與合成代謝以及抗氧化,傳統(tǒng)的自發(fā)熒光分析方法很難區(qū)分這兩種小分子。該研究團隊在第二代NADH熒光探針SoNar的基礎(chǔ)上,通過對底物結(jié)合蛋白的理性設(shè)計和改造,開發(fā)了一系列高性能遺傳編碼熒光探針iNap,特異性檢測NADPH,實現(xiàn)了在活體、活細胞及各種亞細胞結(jié)構(gòu)中對NADPH代謝的高時空分辨檢測與成像。該研究報道了癌細胞內(nèi)不同亞細胞結(jié)構(gòu)中游離的NADPH水平,發(fā)現(xiàn)了氧化應(yīng)激時癌細胞內(nèi)NADPH代謝受葡萄糖水平動態(tài)調(diào)節(jié)。研究團隊也進一步發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)源性類固醇激素DHEA通過抑制G6PD活性和激活A(yù)MPK活性,對NADPH代謝實現(xiàn)雙向調(diào)節(jié)作用。鑒于AMPK信號通路在衰老、糖尿病、肥胖癥以及癌癥中的重要角色,這一研究結(jié)果有望破解DHEA作為一種藥物和膳食補充劑在這些疾病方面發(fā)揮出的有益作用。NADPH作為細胞內(nèi)的還原力,在生理或病理條件下發(fā)揮重要角色。該研究報道的細胞代謝熒光探針iNap,不僅可應(yīng)用于抗氧化、AMPK、脂肪酸合成等代謝途徑與通路分析,也可用于衰老及相關(guān)疾病創(chuàng)新藥物的發(fā)現(xiàn)。

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