化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
重癥肌無力自身抗體檢測(cè)
閱讀：2806 發(fā)布時(shí)間：2018-5-23重癥肌無力（Myasthenia gravis，MG）是一種由神經(jīng)-肌肉接頭處傳遞功能障礙所引起的自身免疫性疾病，臨床主要表現(xiàn)為部分或全身骨骼肌無力和易疲勞，活動(dòng)后癥狀加重，經(jīng)休息后癥狀減輕。患病率為77~150/100萬，女性患病率大于男性，比例約3：2，各年齡段均有發(fā)病，兒童1~5歲居多?？贵w檢測(cè)對(duì)重癥肌無力的診斷具有重要的意義。
（一）乙酰膽堿受體抗體（AChRAb）檢測(cè)
患者體內(nèi)自身免疫反應(yīng)產(chǎn)生的乙酰膽堿受體抗體（Acetylcholine receptor autoantibodies，AChRAb）可作用于神經(jīng)-肌肉接頭處的乙酰膽堿受體，從而導(dǎo)致傳遞功能障礙，引發(fā)重癥肌無力。因此，AChRAb是診斷重癥肌無力的重要標(biāo)志物。
RSR AChRAb檢測(cè)原理：
人血清中的乙酰膽堿受體抗體與不同的AChR單克隆抗體（MAb1、MAb2、MAb3）競(jìng)爭(zhēng)相似的AChR結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)樣本中不存在AChR抗體時(shí)，形成MAb1- AChR-MAb2-/MAb3-生物素復(fù)合物，通過加入鏈霉素過氧化物酶及其顯色底物，檢測(cè)已結(jié)合在微孔板中的AChR。在波長(zhǎng)450nm處讀取吸光值。當(dāng)樣本中存在AChR抗體時(shí)，MAb1- AChR-MAb2-/MAb3-生物素復(fù)合物的形成受到抑制，導(dǎo)致SA-POD結(jié)合量減少，zui終反應(yīng)物在450nm吸光度減少。待測(cè)血清中AChRAb濃度越高，抑制MAb-生物素結(jié)合的作用越明顯。
檢測(cè)流程:
試劑盒特點(diǎn):
*ELISA法定量檢測(cè)乙酰膽堿受體抗體。
靈敏度：92%，于83例重癥肌無力病的患者血清樣本。
特異性：100%，于302例健康志愿者的血清。
標(biāo)準(zhǔn)品范圍：0.5 – 20 nmol/L
臨界值：陰性: < 0.45 nmol/L; 陽性: ≥ 0.45 nmol/L
zui低檢測(cè)限：0.25 nmol/L
適用范圍：于各級(jí)醫(yī)院臨檢實(shí)驗(yàn)室使用并可與自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)配套使用。
適用儀器：酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)為405nm、450nm）
樣本要求：100微升人血清，避免使用脂血、溶血及血漿樣本。
組分性狀：96孔板，液體和凍干粉。
儲(chǔ)存條件及有效期：2-8ºC保存，有效期為9個(gè)月。
（二）肌聯(lián)蛋白抗體（Titin Ab）檢測(cè)
約80%重癥肌無力患者可檢測(cè)到胸腺病變，在這其中約10%的患者會(huì)發(fā)展為胸腺上皮細(xì)胞瘤（TET）或胸腺癌。因此盡早對(duì)胸腺瘤做出診斷，并施行胸腺切除術(shù)有助于患者取得較好的預(yù)后效果。早在60 年代初Strauss 等就發(fā)現(xiàn)在MG患者血清中存在一種能與骨骼肌橫紋起反應(yīng)的自身抗體，其后證明該抗體能與胸腺中的肌樣細(xì)胞起反應(yīng)。
多數(shù)胸腺受影響的患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生乙酰膽堿受體抗體（AChRAb），這個(gè)抗體可以用RSR’s AChRAb ELISA 試劑盒檢測(cè)診斷重癥肌無力。同時(shí)，患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生針對(duì)條紋肌的自身抗體，即包含肌聯(lián)蛋白（Titin）抗體。肌聯(lián)蛋白是條紋肌中具有*分子量的蛋白質(zhì)。它的主要免疫應(yīng)答區(qū)位于其中一個(gè)分子量為30 kDa的蛋白片段上。針對(duì)這個(gè)片段的抗體可能會(huì)與乙酰膽堿受體的抗原決定簇進(jìn)行交叉結(jié)合，即成為副腫瘤綜合癥型重癥肌無力的病因。因此在本產(chǎn)品中使用了重組的肌聯(lián)蛋白片斷（MGT30肽段）作為檢測(cè)抗原，經(jīng)證實(shí)本試劑盒使用的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法優(yōu)于基于人或猴條紋肌切片的免疫熒光檢測(cè)法。
Titin Ab Elisa操作流程：
（三）肌肉特異性受體酪氨酸激酶抗體（MuSK Ab）檢測(cè)
Muscle-specific receptor tyrosine kinas，MuSK Ab），是重癥肌無力的又一重要標(biāo)志物。因?yàn)樵谥匕Y肌無力患者中，10%-20%患者血清中檢測(cè)不出乙酰膽堿受體抗體，稱之為血清陰性MG。但其中約50%的血清陰性MG中可檢測(cè)出MuSK 抗體。通過對(duì)MuSK抗體的檢測(cè)，可以更全面地輔助診斷重癥肌無力。RSR MuSK自身抗體檢測(cè)試劑盒采用放射免疫法檢測(cè)患者血清中MuSK自身抗體。
MuSK Ab RIA操作流程：
參考文獻(xiàn)：
1. Gilhus NE, Verschuuren JJ. Myasthenia gravis: subgroup classification and therapeutic strategies [J]. Lancet Neurol 2015; 14(10): 1023-1036.
2. Oosterhuis HJ, Limburg PC, Hummel-Tappel E, et al. Anti-acetylcholine receptor antibodies in myasthenia gravis. Part 2. Clinical and serological follow-up of individual patients [J]. J Neurol Sci 1983; 58(3): 371-385.
3.Hewer R, Matthews I, Chen S, McGrath V, Evans M, Roberts E, et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies. Clin Chim Acta 2006;364:159-66.