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Ultimate® SEC色譜柱的使用說明書
Ultimate® SEC色譜柱性能介紹
Ultimate® SEC色譜柱是硅膠基質(zhì)的體積排阻色譜柱，其色譜填料為高純度、具有良好穩(wěn)定性的硅膠微球表面鍵合親水性高分子聚合物。月旭公司采用特殊的表面修飾技術(shù)，確保了該填料具有良好的穩(wěn)定性和批次之間的較好重現(xiàn)性。
Ultimate® SEC填料采用*的化學(xué)鍵合技術(shù)，在硅球表面鍵合了親水性聚合物以及親水性二醇基官能團(tuán)。雙重鍵合機(jī)制使水溶性高分子聚合物、蛋白、生物酶、多肽等生物樣品的非特異性吸附極小，廣泛應(yīng)用于水溶性聚合物及生物大分子的分離和測定。
Ultimate® SEC色譜柱性能介紹
Ultimate® SEC色譜柱使用步驟：
1.將Ultimate® SEC色譜柱連接在HPLC系統(tǒng)上；
2.設(shè)置流速在0.8-1.0mL/min，首先用純水相平衡至少40min，然后用所使用的有機(jī)溶劑平衡至少30mi；
3.使用完畢后，先用純水相沖洗色譜柱至少40min以上，然后用高比例的有機(jī)相沖洗至少30min。
Ultimate® SEC色譜柱使用注意事項(xiàng)
1.使用前，請(qǐng)把色譜柱用純水沖洗40-60個(gè)柱體積，以確保柱填料能夠充分被潤濕，防止色譜柱在使用過程中造成固定相塌陷；
2.色譜柱在用純水流動(dòng)相分析時(shí)，需要充分地用純水流動(dòng)相平衡色譜柱，待基線充分平穩(wěn)后進(jìn)樣分析；
3.由于該類型色譜柱一般用的流動(dòng)性是純水相的緩沖鹽，因而色譜柱在使用完以后需要用純水流動(dòng)相充分沖洗色譜柱，以保證緩沖鹽被充分的清除，防止緩沖鹽對(duì)色譜柱固定相造成的傷害；
4.長時(shí)間不使用色譜柱時(shí)，請(qǐng)將該類型色譜柱保存在高比例的有機(jī)溶劑-水溶液中，一般有機(jī)溶劑的比例為90%。
Ultimate® SEC色譜柱樣品與流動(dòng)相
為了避免色譜柱的堵塞，所有的流動(dòng)相和樣品都必須用0.45μm或0.2μm的濾膜過濾后使用。Ultimate® SEC柱可以使用水或有機(jī)溶劑和水的混合物，如甲醇(或乙腈)的水溶液等作為流動(dòng)相。流動(dòng)相在使用前必須脫氣處理。
Ultimate® SEC色譜柱的保養(yǎng)
1.溶劑
新的Ultimate® SEC柱中的流動(dòng)相是90%的乙腈水溶液。長期不用其色譜柱內(nèi)硅膠填料可能會(huì)干涸。此時(shí)需要用10-20倍柱體積的超純水進(jìn)行沖洗以確保色譜柱的重新活化。然后可根據(jù)所需的流動(dòng)相平衡色譜柱。流速由0.2mL/min逐漸升高至所需的流速，直至基線穩(wěn)定為止。如果柱壓和基線波動(dòng)較大，這可能是氣泡進(jìn)入了色譜柱。這時(shí)可用較高流速?zèng)_洗色譜柱2-5min，例如對(duì)于7.8×300mm的色譜柱可采用流速2.0mL/min。
2.pH
為了獲得*的分離效果和延長柱的使用壽命，盡量使用pH在2-8.5范圍內(nèi)的流動(dòng)相。
3.壓力
Ultimate® SEC柱可在高至6000psi的壓力下使用，但正常的操作壓力應(yīng)當(dāng)?shù)陀?000psi。長時(shí)間在高壓下使用會(huì)損壞色譜柱和輸液泵。一般情況下，柱壓會(huì)隨著色譜柱使用時(shí)間的增加而逐漸升高。此時(shí)建議將色譜柱反接后用合適的溶劑進(jìn)行清洗、重新活化。
4.溫度
為了獲得zui長的使用時(shí)間，*操作溫度為10-30℃。
Ultimate® SEC色譜柱的再生步驟
Ultimate® SEC色譜柱的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化，越是生物大分子，越需要經(jīng)常地對(duì)柱子進(jìn)行再生，因?yàn)樗鼈兺驗(yàn)榫哂休^大的體積而堵塞色譜柱，如果使用過程中發(fā)生柱壓突然升高或者色譜峰的峰型會(huì)與柱子發(fā)生置換。可以通過注射核糖核酸酶來測試柱子的置換情況。如果核糖核酸酶的峰有拖尾，那么柱子需要做以下處理：
將色譜柱與檢測器斷開；把柱子流路方向反過來，以高比例有機(jī)相(甲醇或乙腈)以0.2mL/min的流速?zèng)_洗一整夜，用30-50倍柱體積的超純水將色譜柱沖洗干凈。再生之后按照正常方向使用。