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叮!您的“酶聯(lián)免疫吸附”知識(shí)大禮包已到達(dá)!

閱讀:913        發(fā)布時(shí)間:2023/11/20
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01 什么是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定?

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA),是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。自上世紀(jì)70年代初問世以來,發(fā)展迅速。 

ELISA是基于抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)建立起來的一種快速檢測(cè)技術(shù), 它將酶促反應(yīng)的高效率和免疫反應(yīng)的高度專一性有機(jī)地結(jié)合起來,可對(duì)各種微量有機(jī)物含量進(jìn)行測(cè)定。 


抗原、抗體小知識(shí)

抗原決定簇示意圖

抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)??乖M(jìn)入機(jī)體后,可刺激機(jī)體引起細(xì)胞免疫和產(chǎn)生抗體??乖姆磻?yīng)性取決于抗原決定簇。一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定簇。

抗原抗體結(jié)合反應(yīng)示意圖

抗體是指能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。

抗原抗體的關(guān)系就如同特定的鑰匙和鎖,一一對(duì)應(yīng),只有找到正確的鑰匙--抗原才能打開對(duì)應(yīng)的鎖---抗體。


02 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理

image.png

1、使抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面,并保持活性。

2、使抗體或抗原與某種酶連接成酶標(biāo)記抗體或抗原。

3、在測(cè)定時(shí),把受檢抗體(或抗原)和酶標(biāo)抗原(或抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原(或抗體)一起反應(yīng)。

4、采用洗滌的方法去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原(或抗體),最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。

5、加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)?/span>有色產(chǎn)物。

6、產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可以根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進(jìn)行定性或者定量分析。


03 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分類

 間接法(Indirect ELISA):

將已知抗原吸附于固相載體,酶標(biāo)記二抗

檢測(cè)待測(cè)液體中未知抗體

image.png


雙抗體夾心法(Sandwich ELISA):

將已知抗體吸附于固相載體,酶標(biāo)記一抗

檢測(cè)待測(cè)液體中的可溶性抗原

image.png

競(jìng)爭(zhēng)法(Competitive ELISA):

將已知抗體或抗原吸附于固相載體,酶標(biāo)記抗原或抗體

檢測(cè)待測(cè)液體中的可溶性抗原或抗體

image.png


04 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)

1、檢測(cè)速度快:可以制備成相應(yīng)檢測(cè)試劑盒,多樣品同時(shí)檢測(cè),大大縮短檢測(cè)時(shí)間。

2、特異性強(qiáng):其利用抗原與抗體的特異性結(jié)合測(cè)定,具有選擇性高的特點(diǎn)。

3、靈敏度高:結(jié)果的準(zhǔn)確性和方法的靈敏度與儀器分析方法一致。

4、操作簡(jiǎn)單:不需要大型儀器設(shè)備,試劑盒可以直接處理,不需要二次加工。

5、便于推廣:對(duì)試驗(yàn)人員的技術(shù)要求不高,便于技術(shù)推廣。


05 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的應(yīng)用

由于酶聯(lián)免疫法具有快速、操作方便、靈敏度高的特點(diǎn),適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),其應(yīng)用范圍也在不斷擴(kuò)大,目前已被廣泛應(yīng)用于食品檢測(cè)醫(yī)學(xué)檢測(cè)中。在食品檢測(cè)中主要用于檢測(cè)植物性食品的農(nóng)藥殘留、動(dòng)物性食品的獸藥殘留、真菌毒素、食源性微生物及食品中特殊蛋白質(zhì)、重金屬等。


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